01 ug/ml,0.1μg/ml和1ug/ml)处理人NSCLC细胞24小时,ELISA法测上清中的IL-8蛋白浓度。之后采用EGF(100ng/ml)单独和分别联合EGFR-Tki(厄洛替尼10μM,1μM),PI3K抑制剂GDC-0941和BEZ-235(1μM和100nM),以及ERK1/2的抑制剂PD98059(10μM和1μM)处理SPC-A1细胞系24小时,测上清中的IL-8浓度。最后,采用EGF(100ng/ml)单独和联合新的PI3K抑制剂SHBM1009 无 (10,6,3, 1μM)作用于SPC-A1细胞,测12小时,24小时,48小时上清中的IL－8浓度。所有实验设立空白对照组。结果： EGF刺激SPC-A1细胞系24小时,上清中的IL-8显著升高,并呈EGF浓度依赖趋势。对照组上清中的IL-8浓度为(43.07±12.26pg/ml),而EGF(10ng,100ng和1ug/ml)刺激组的上清中IL-8水平分别为(103.68±11/36,216.91±8.07和232.21±42.44pg/m1),p值分别为(p<0.01,p<0.001和p<0.01或p<0.05)。而EGFR-Tki(厄洛替尼10μM)能抑制约25%的细胞生长(p<0.01)。BEZ-235可抑制细胞生长约30%-40%(p<0.01)。SHBM1009的抑制作用最强,根据浓度的不同(0.1－1.0和10μM)可抑制约25-35%到60%的细胞生长(p
信号转导在细胞的代谢、分裂、分化、及凋亡过程中起着重要作用,肿瘤发生和转移与细胞的过度激活有关,

PI3K/Akt信号通路是细胞内重要的信号转导通路,通过影响下游多种效应分子的活化状态,发挥着抑制细胞凋亡和促进细胞增殖的重要作用。因为PI3K是肿瘤的一个重要靶点,PI3K抑制剂的研究吸引了广泛关注。近年来,多个PI3K抑制剂已经进入临床研究阶段,包括GSK2126458、SF-1126、NVP-BEZ235、XL-147、PX-866、GDC-0941、ZSTK474、GSK2126458 selleck BIBW-2992是不可逆EGFR和HER2双重抑制剂,抑制野生型、耐受和双重耐受的H1666、H3255和NC11875细胞(IC50分别为7、6和93

nM),现处于Ⅱ期临床研究,用于治疗乳腺癌和结直肠癌等。我们通过改变母核来看取代后的活性有没有提高。 阳性对照药GSK2126458的合成比较繁琐,用丙二酸亚异丙酯代替乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯,反应温度降低,缩短了合成步骤,同时,用sonagashira反应和Diels-Alder反应合成了哒嗪环,避免使用昂贵的4-碘哒嗪。 我们合成了一系列BIBW-2992的类似物(TM1~7均未见文献报道),通过高效液相色谱,核磁共振氢谱、质谱等分析方法验证了类似物,进行了体外抗肿瘤活性评价,期望从中筛选出活性优于BIBW-2992的候选药物。 药理试验显示,大部分TM化合物都显示了较强的抗癌活性,进一步的研究还在继续进行。
背景： 在我国,胃癌是最常见恶性肿瘤之一,严重危害人类健康。手术治疗仍然是根治胃癌的最有效方法,然而仅有少数胃癌患者可通过单纯的手术治疗而获得治愈,大部分患者确诊时也发现远处转移,失去手术机会,多数胃癌患者死于肿瘤的再发或远处转移。内科治疗仍是胃癌主要的治疗方法,目前随着分子生物学的发展及临床用药个体化的重视,优化治疗方案,实现用药个体化成为基础研究和临床试验共同关注的问题,主要体现在生物标志物的检测,预测疗效、判断预后、指导用药；分子靶向药物的研发与临床应用。EGFR、Her-2/neu、均已被证实存在多种肿瘤组织中,与肿瘤的预后有相关性,并且做为分子靶点指导分子靶向药物应用。TopoⅡα是许多化疗药物如鬼臼乙叉甙、替尼泊甙、阿霉素等药物的作用靶点,TopoⅡα含量的高低,可以作为判定各种肿瘤对抗癌药物的敏感性或抗药性的指标。 GS-7340厂商 目的： 1.研究EGFR、Her-2/neu、TopoⅡα在胃癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系。 2.探讨EGFR、Her-2/neu、TopoⅡα做为分子靶点指导胃癌靶向治疗的理论意义。 方法： 1.收集河南省人民医院2008年1月-2010年1月期间经手术治疗的108例胃腺癌组织作为实验组,22例胃正常组织作为对照组。

2.应用免疫组织化学方法(SP法)检测108例胃癌组织和22例胃正常组织中EGFR、Her-2/neu、TopoⅡα蛋白表达情况。 3.用统计学软件SPSS17.0分析EGFR、Her-2/neu、TopoⅡα蛋白的表达与患者各临床病理特征之间的关系。 结果： 1.胃癌组织中EGFR、Her-2/neu、TopoⅡα阳性表达率分别为41.67%、31.5%、53.7%,22例正常胃组织阳性表达率分别为和0%、0%、4.5%。阴性与阳性结果有显著统计学差异(P0.05)；与胃癌的部位、细胞分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均呈正相关(P
目的：探讨和研究雷公藤红素(Celastrol)和ABT-737联合应用对人肝癌细胞Bel-7402和HepG2凋亡的影响及其作用机制。 方法：1.MTT法检测ABT-737和雷公藤红素(Celastrol)单用及合用人肝癌细胞Bel-7402和HepG2的细胞存活率,并采用软件CalcuSyn计算CI值；2.DAPI染色观察ABT-737和雷公藤红素(Celastrol)作用后,细胞凋亡小体的产生；3.PI染色结合流式细胞术检测ABT-737和雷公藤红素(Celastrol)作用后细胞凋亡率的变化；4.JC1染色观察ABT-737和雷公藤红素(Celastrol)作用后,线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,ΔΨm)的变化；5. Western blotting法检测ABT-737和雷公藤红素(Celastrol)作用后,凋亡相关蛋白,Hsp90客户蛋白,NOXA等关键蛋白的含量变化；6. real-time RT-PCR法检测雷公藤红素(Celastrol)作用后,细胞NOXA基因转录水平的变化；7.小分子RNA干扰技术敲除ATF4,观察雷公藤红素(Celastrol)作用后,细胞NOXA基因转录水平的变化；8.小分子RNA干扰技术敲除NOXA,观察ABT-737和雷公藤红素(Celastrol)作用后,细胞凋亡和细胞存活率的变化；9.免疫共沉淀法观察ABT-737和雷公藤红素(Celastrol)作用后,NOXA蛋白与Mcl-1蛋白的结合情况。 结果：1.

05)；MDC染色显示随rhG-CSF给药浓度增加,巨自噬空泡数量逐渐上调,呈剂量依赖性,显示随给药浓度增加,自噬活性也相应增强,差异具有统计学意义(p<0.05)；rhG-CSF组大鼠神经功能学评分较模型组有降低,差异有统计学意义(p<0.05)；治疗后较治疗前比较,大鼠的神经功能学评分有降低,差异有统计学意义(p
当今世界，核能在工业、国防、科技、医疗等领域的普及应用，它在造福人类的同时，也不可避免的给世界带来严重的核辐射危险，不仅对环境造成污染，更重要的是给人类的健康安全带来了严峻的挑战。我国核能技术飞速发展，不仅拥有核武器、核潜艇等国防力量，而且拥有大量的核电站。2011年日本福岛核电站因里氏9.0级地震而泄露在对日本造成巨大危害的同时也给我国带来了核恐慌。现代生物学技术不断前进，放射治疗是目前临床恶性肿瘤治疗的常用方法之一。但越来越多临床证据表明：电离辐射在杀伤肿瘤细胞的同时，不可避免的会造成对正常组织的损伤。尽管现代放疗技术和方法都有很大发展，这一副作用仍严重影响放疗在临床上的应用。

selleck抑制剂 放射性肺纤维化是胸部肿瘤患者放射治疗中常见的并发症，也是核与辐射突发事件中受大剂量照射伤员常见的病理损伤，是导致肿瘤病人放疗失败和急性放射病伤员病程后期的主要死因之一。国内外对放射性肺纤维化虽然进行了多年的研究，但辐射导致肺纤维化发生的机制尚不十分清楚，由于机制不清至今在临床上还未找到防治放射性肺纤维化良好的医学处置方法。因此，针对放射性肺纤维化发生过程中的某个关键环节作为靶点，以探讨电离辐射(ionizing radiation, IR)与肺纤维化的关系及其机制，为防治肺纤维化的研究提供新的思路和方案。 寻找更多 肺纤维化以肺泡上皮细胞受损以及成纤维细胞/肌成纤维细胞聚集为特征，并有胶原及其他细胞外基质沉积，最终影响正常肺组织修复过程及细胞外基质异常沉积而导致纤维化发生。由于肌成纤维细胞在这一病理过程中起重要作用，所以它的起源是肺纤维化研究的热点和关键点。研究表明，在损伤因素刺激下，上皮细胞可逐渐失去上皮特性并获得成纤维细胞等间质细胞特性，即发生上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）。在特发性肺纤维化的动物模型以及病人标本中，都发现EMT的存在。在某些因子参与和诱导下，与EMT相关性及特异性转录因子被活化，特异性细胞膜蛋白表达增强，细胞骨架蛋白发生重构，细胞外基质降解酶发生改变以及特异性微小RNA的变化等等细胞内分子水平的变化都可引发并维持EMT。电离辐射是诱导EMT的重要因素之一。已有研究显示microRNA-200c可以抑制EMT，而TBK1是miR-200c直接靶点。因此，探讨TBK1与IR,

EMT发生的相关性，以及TBK1作用的机制，将为明确放射性肺纤维化发生提供重要的实验依据。 本研究选取肺泡上皮细胞作为实验对象，通过EMT标志物等指标研究IR对EMT的影响，并围绕TBK1表达水平的变化，对TBK1进行干扰，进一步明确TBK1及其下游信号通路在IR诱导EMT中的作用。 研究内容： 1、辐射对肺泡上皮细胞上皮间质转化的影响：采用人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)和大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)为研究对象，给予不同照射剂量，选取不同照射时间，观察在此条件下EMT标志物变化情况，建立辐射诱导EMT细胞模型； 2、干扰TBK1对辐射诱导肺泡上皮细胞上皮间质转化的影响：①脂质体转染siTBK1，明确干扰效果；②干扰TBK1后选择适当剂量及时间照射，观察EMT变化； 3、TBK1对辐射诱导肺泡上皮细胞上皮间质转化的作用机制探讨：①干扰TBK1，观察辐射诱导EMT细胞模型中EMT相关转录因子的变化；②TBK1作用可能相关信号通路探讨。

实验方法： 1、采用人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)和大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)，对其进行2、4、6、8、10Gy60Co Galunisertib γ射线照射，通过Western Blot (WB)实验技术，检测EMT标志物，建立辐射诱导EMT细胞模型； 2、通过WB检测辐射对细胞TBK1表达水平的影响； 3、利用lipo2000脂质体转染法干扰细胞中TBK1的表达，用WB及Real-time-PCR检测转染效果； 4、干扰TBK1，通过WB，免疫荧光实验检测EMT标记物变化，评价TBK1对IR诱导EMT影响； 5、干扰TBK1，采用Real-time PCR和WB检测EMT相关转录因子的变化；以及过表达转录因子ZEB1对TBK1调节IR诱导EMT的效应； 6、干扰TBK1，采用Real-time PCR检测照射后细胞TGF-β表达变化；通过WB实验，观察TGF-β/Smad3通路是否参与TBK1的调节； 7、干扰TBK1，采用WB检测照射后细胞NF-κB通路表达变化，观察其是否参与TBK1的调节； 8、干扰TBK1，采用WB检测照射后细胞GSK-3β的表达变化，通过给予GSK-3β特异性抑制剂SB216763，观察GSK-3β在TBK1调节IR诱导EMT中的作用；联合过表达转录因子ZEB1，探讨TBK1和GSK-3β的关系。 9、统计方法：采用t检验；方差分析等， P＜0.

7倍，效果显著。说明囊素能提高杂交瘤细胞抗体分泌的速度，而不影响其增殖。 2、囊素对杂交瘤细胞抗体mRNA表达的影响。用ELISA法鉴定杂交瘤细胞E8株分泌的单克隆抗体为IgG_1。据此所克隆的IgG_1重链γ_1恒定区C_H3片段与GenBank中源序列的同源性达99.1％，由其推导的氨基酸序列的同源性为98.2％。在此基础上，用定量RT-PCR技术证明囊素诱导杂交瘤细胞抗体mRNA表达的作用具有时间和剂量依赖性，50μg／mL囊素处理60min，γ_1 mRNA的表达出现高峰。证明囊素能在转录水平上上调杂交瘤细胞单克隆抗体基因的表达。 3、信号转导抑制剂对囊素刺激杂交瘤细胞抗体分泌及其mRNA表达的影响。蛋白激酶A(PKA)抑制剂4-Cyano-3-M-thylisoquinoline、酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂Genistein和丝裂原活化的蛋白激酶激酶(MAPKK)抑制剂PD98059能有效地阻断囊素诱导的杂交瘤细胞抗体分泌和表达的增加。这三种蛋白激酶抑制剂对囊素促杂交瘤细胞抗体分泌的抑制率分别为74.55％、91.13％和80.69％。表明囊素诱导的杂交瘤细胞抗体表达和分泌的增加是通过激活该细胞的PKA、TPK和MAPKK，进而通过其后相应的信号传导通路激活有关的转录因子实现的。 4、囊素对杂交瘤细胞PKA活性的影响。50μg／mL囊素能引起杂交瘤细胞中PKA

绥德年：囊素对杂交瘤细胞增殖和抗体分泌的影响及其信号通路 活性显著升高，Zmin达峰值，10min RF恢复到基础水平。Genistein和 那个 PD98059不能抑 制囊素诱导的杂交瘤细胞PKA的活化。说明在囊素刺激杂交瘤细胞抗体分泌的信号 通路中，PKA所涉及的信号通路独主于WK和 MAPKK所涉及的信号通路，或者 PKA 位于这两个激酶的上游并与之构成一个完整的信号通路。 5、囊素对杂交瘤细胞膜性酪氨酸蛋白激酶（m－TPK）if。＆的影响。hK一般有受 体型TPK（RT）和非受体型TPK两种，RTK为跨膜型的。用超速离。G法制备杂交瘤 细胞m1PK酶液，并测定其活性。结果表明 50pg／mL囊素能引起杂交瘤细胞中 m1PK 活性显著升高，Zmin达峰值，smin gF恢复到基础水平。4－Cyano上一M＜hylisoqulnollne 和 PD98059不能抑制囊素诱导的杂交瘤细胞m－TPK活性的增力。。RTK一般是通过 RT K－RIS－MAPK途径或队C－PI3K途径发挥作用。抑制试验表明，PLC特异抑制剂U －73 22和PI3K特异抑制剂HeParin均不能抑制囊素诱导的杂交瘤细胞抗体表达和分 泌的增加。说明在杂交瘤细胞囊素信号通路中；n．TPK位于MAPKK的上游，两者 构成一条信号通路。而且这条信号通路，独立于PKA所涉及的信号通路。PKA是一 而且 种第M信使cAMP依赖的酶。有研究报道囊素可提高细胞。AMP水平。Go／Gi群Ga 蛋白特异抑制剂NF023

不能有效抑命］囊素对杂交瘤细胞抗体分泌的促进作用，提示 囊素可能是通过Gs群Ga蛋白来传递信号的。 综上所述，囊素通过激活杂交瘤细胞仅一cAMP－PKA和阿K－Ras－ERK／2信号通 路，在转录水平上协同上调抗体基因的表达，引起抗体分泌的增加。而且这种促杂交 瘤细胞抗体分。必的增力。效应与细胞增殖无关。本研究进一步丰富了抗体生成调控的内 客，并为囊素的临床应用提供了可靠的实验依据。
背景: 冠心病在40~49岁人群中发病率为58.36%,死亡数占人口死亡数的1/3~1/2，占心脏病死亡数的50%~75%。缺血预处理具有强大保护缺血心肌作用，用药物尤其是中药诱导这种内源性调控保护可能是极积有效治疗冠心病新途径。 目的：探索能够模拟缺血预处理延迟保护作用的中药，研究大蒜素延迟保护的效果及其信号转导作用机制。 方法： 大蒜素延迟保护作用的整体动物实验部分：健康新西兰大白兔32只，随机分为缺血再灌注组（30min缺血和2h再灌注损伤）、缺血预处理组（4次5min缺血5min再灌注预处理）、大蒜素预处理大剂量组（1.0mg/kg大蒜素预处理）、大蒜素预处理小剂量组（0.5mg/kg大蒜素预处理）。分别进行预处理（除缺血再灌注组）24h后，再结扎冠状动脉左前降支30min，复灌2h，造成缺血再灌注损伤模型。观察心肌梗死范围（梗死区心肌重量占危险区心肌重量的百分比）、血流动力学（HR、LVEDP、LVPSP、CF、±dp/dt

R428化学结构 max）、电镜下心肌超微形态结构、生化指标（血浆LDH、CK活性及组织匀浆液MDA、Mn-SOD含量）改变情况。 大蒜素延迟保护作用的离体细胞实验部分：利用培养的离体乳鼠心肌细胞模型，研究①大蒜素预处理延迟保护的量效关系：5、10、20、50μg/ml浓度大蒜素与乳鼠心肌细胞共同孵育30min进行预处理，24h后，用细胞存活率、细胞内外LDH活性及MDA生成等指标来观察不同剂量大蒜素对细胞低氧复氧损伤（2h低氧，2h复氧）的影响以探讨大蒜素预处理延迟保护作用的剂量-效应关系。②大蒜素预处理延迟保护的时效关系：20μg/ml浓度大蒜素与细胞共同孵育30min进行预处理后，在12、24、36h分别进行低氧复氧损伤，以观察大蒜素预处理延迟保护作用的时间-效应关系。③信号阻断剂对大蒜素预处理延迟保护作用的影响：PKC阻断剂H-7或MAPK阻断剂PD98059与细胞共同孵育10min后，再用大蒜素（20μg/ml）预处理30min，24h后观察信号阻断剂对大蒜素延迟保护作用的影响。④在此基础上，进行大蒜素预处理延迟保护作用的信号转导机制研究：大蒜素以及大蒜素加H-7或PD98059预处理24h后，直接用免疫杂交法测定细胞裂解液中nPKC-ε、HSP70和NF-κB的蛋白表达情况。 结果： 整体动物实验部分：①缺血损伤使心肌梗死区重量占危险区重量百分比达52.9±6.5%，缺血和大蒜素（1mg/kg体重）预处理使百分比分别降至24.6±5.0%、36.7±5.5%（P<0.01或P<0.05）；LVPSP分别提高61.58%及94.33%（P 小剂量组。④大蒜素（0.5、1mg/kg体重）预处理可使血浆LDH活性较缺血再灌损伤组分别降低30.51%、34.96%（P<0.05），组织匀浆液中MDA含量分别减少23.74%、21.72%（P0.05。50μg/ml组细胞存活率为38.34%，低于低氧复氧损伤组( P<0.01)。APC20组上清液中LDH活性较低氧复氧损伤组降低46.

05）。加入茶多酚干预后，LOX-1mRNA表达均下降，但正常对照组加茶多酚与干预前差异无统计学意义，高糖组加入茶多酚后，差异有统计学意义（P＜0.05）。 4与正常对照组相比，高糖组p38MAPK蛋白浓度增加，差异有统计学意义，加入茶多酚后，其表达量下降，差异有统计学意义。分别与正常对照组及高糖组相比较，加入p38MAPK抑制剂SB203580后，sFlt-1mRNA、蛋白及LOX-1mRNA几乎无表达。 结论： 1高糖环境可以引起脐静脉内皮细胞sFlt-1的表达活性降低，LOX-1含量增加，两者可能在糖尿病血管病变的进程中发挥重要作用。 2茶多酚可以明显降低高糖诱导的脐静脉内皮细胞LOX-1的高表达并上调sFlt-1的表达，减轻高糖对脐静脉内皮细胞的损伤作用，减少动脉硬化的发生及新生血管的形成。 3p38MAPK在高糖环境下可被激活，其抑制剂可明显抑制LOX-1及sFlt-1的表达量，表明高糖诱导的HUVEC的LOX-1及sFlt-1的表达变化可能通过p38MAPK通路。
目的：目前，缺血性脑病的发病率在全球不断上升，形势也日益严峻。多年来，许多研究人员致力于研究脑缺血耐受机体的内源性保护机制，以期提高神经细胞对缺血性损害的抵抗力，使其在遭受较严重的缺血打击后仍保持存活，并在恢复供血后仍具有正常的生理功能。

我室既往研究证实，反复3次股动脉夹闭和再灌的肢体缺血预处理（limb ischemic preconditioning，LIP）可减轻随后即刻发生的脑缺血再灌注引起的大鼠海马CA1区锥体神经元延迟性死亡和凋亡、诱导脑缺血耐受，证实了远隔器官缺血预处理对脑的保护作用。虽然脑缺血的发生无法预测，但是在心肺分流术等一些发生脑缺血危险几率较高的手术中，全脑缺血性损伤是可以预知的。如果能在损伤发生之前就施予干预措施，无疑具有重要的现实意义。因此，探讨LIP脑保护作用的机制可为开发神经保护药物或方法提供新的思路。 MAPK是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在哺乳类细胞目前已发现存在着下述三条并行的MAPKs信号通路：ERK、JNK和p38MAPK通路。我室既往采用免疫组织化学、硫堇染色以及Western

无 3-deazaneplanocin A blot等方法研究证实，p38MAPK参与了LIP诱导的大鼠脑缺血耐受，并且在这一过程中上调了HSP70的表达、抑制了凋亡通路、改变了超氧化物歧化酶的活性。但是，p38MAPK的神经保护机制尚不完全清楚。 谷氨酸是中枢神经系统最主要的兴奋性神经递质，但过高浓度的谷氨酸又具有极强的神经毒性。脑缺血时，细胞外液中谷氨酸等兴奋性氨基酸浓度异常升高，通过钙超载、干扰能量代谢等导致细胞损伤。细胞外谷氨酸清除的主要途径是兴奋性氨基酸转运体（excitatory amino transporters,EAATs）摄取谷氨酸。目前已发现五种高亲和力谷氨酸转运体：GLAST（EAAT1）、GLT-1（EAAT2）、EAAC1（EAAT3）、EAAT4和EAAT5。研究证实，GLT-1在防止其兴奋性毒性作用方面发挥着更为重要的作用。因此，对GLT-1进行调制，增强其对细胞外液中谷氨酸的摄取以及防止其出现逆向转运，是防止脑缺血时细胞外液中谷氨酸浓度异常升高及其神经毒性作用的有效方法。我室研究发现，脑缺血预处理可抑制全脑缺血打击引起的海马CA1区锥体神经元的延迟性死亡，同时可上调海马CA1区GLT-1的表达，抑制脑缺血引起的细胞外液中谷氨酸浓度的升高；而应用GLT-1特异性抑制剂DHK或GLT-1反义寡聚脱氧核苷酸后，均能剂量依赖性的阻断脑缺血预处理对全脑缺血大鼠的神经保护作用，提示GLT-1参与了脑缺血预处理诱导的脑缺血耐受。 那么，LIP诱导的脑缺血耐受是否有GLT-1的参与呢？如果有，GLT-1与我们先前研究的p38MAPK之间是否有级联关系？实际上，既往文献中有关p38MAPK对GLT-1调制作用的研究已有报道。2009年，Tsai等在百日咳毒素致热痛觉过敏大鼠模型中发现，p38MAPK特异性抑制剂SB203580能减轻此种痛敏反应、增加脑脊液中兴奋性氨基酸、下调谷氨酸转运体的表达。此外，Matos等在阿耳茨海默氏病的研究中证实，SB203580能够下调星形胶质细胞中GLT-1的表达。我室在近期的工作中，也证实了p38MAPK通过调制GLT-1在脑缺血预处理诱导的脑缺血耐受中发挥了重要作用。 因此，本研究的目的在于：①观察LIP不同时间窗对脑缺血再灌注损伤的影响，并应用GLT-1特异性抑制剂DHK，观察抑制GLT-1表达对LIP诱导的脑缺血耐受的影响；②观察并比较LIP后大鼠海马CA1区p38MAPK和GLT-1表达的时间过程；③应用p38MAPK抑制剂SB203580，观察抑制p38MAPK后，大鼠海马CA1区GLT-1表达的变化。通过上述研究，探讨p38MAPK是否通过调制GLT-1参与肢体缺血预处理诱导的脑缺血耐受，为脑缺血性疾病的防治提供新的思路。

1LIP减轻大鼠全脑缺血再灌注引起的海马CA1区迟发性神经元死亡及GLT-1在此过程中的作用 1.1观察LIP不同时间窗对脑缺血再灌注损伤的影响 50只Wistar大鼠永久凝闭双侧椎动脉恢复两天后，随机分为四组：①全脑缺血的sham组（n=5）：暴露双侧颈总动脉8min，但不阻断血流；②全脑缺血组（n=5）：夹闭双侧颈总动脉8min后恢复再灌注；③LIP+全脑缺血组（n=35）：夹闭双侧股动脉10min、再灌流10min，反复3次，之后行8min全脑缺血，根据LIP与全脑缺血间隔时间不同分为LIP0h、LIP1h、LIP3h、LIP6h、LIP12h、LIP1d和LIP2d组；④LIP的sham+全脑缺血组（n=5）：根据③中结果选择脑保护效果最好的时间点，即暴露双侧股动脉后即刻（LIP0h组）行8min全脑缺血。以上各组大鼠在sham手术或末次缺血再灌后7d断头取脑，冠状切片后分别进行硫堇染色和HE染色。低倍镜下观察硫堇染色的海马组织形态，参照Kitagawa（1990）和Kato（1991）分级方法，对海马CA1区确定组织学分级（histological 更多 grade，HG），标准如下：0级：无神经元死亡；Ⅰ：散在神经元死亡；Ⅱ级：成片神经元死亡；Ⅲ级：几乎全部神经元死亡。高倍镜计数双侧海马CA1区每1mm区段内细胞膜完整、胞核饱满、核仁清晰的锥体细胞数目，每张切片双侧海马各计数3个区段，取平均数作为神经元密度（neuronal density，ND）。HE染色观察胶质细胞的变化。 硫堇染色结果显示，全脑缺血的sham组大鼠海马CA1区锥体细胞排列整齐、致密，为2～3层，无细胞缺失，细胞形态完整、边界清晰，胞核饱满、核仁深染、清晰，无明显的延迟性神经元死亡（delayedneuronal death, DND），HG为0级，ND值为167±5.21（cells/mm，下同）。全脑缺血组与LIP的sham+全脑缺血组大鼠海马CA1区有明显的组织学损伤，出现严重的DND，锥体细胞形态改变明显，几乎全部神经元死亡或缺失，HG均为Ⅲ级，ND值分别为36±9.28、35±5.

05）。心肌梗死面积和cTnI：与NDM-S组比较，DM-S组LV+RV明显降低（P0.05）；DM-SP组IS、IS/ARR和血浆cTnI浓度明显高于NDM-SP组（P 0.05）。与NDM-IR组比较，NDM-SP组和NDM-SB组GSK-3β磷酸化水平（p-GSK-3β/GSK-3β）表达增加（P
目的： 采用不同剂量阿司匹林(Aspirin/acetylsalicylic acid ASA)干预骨髓间充质干细胞（Bone marrow stromal cells BMSCs）移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤，观察各组血清TNF-α浓度、神经功能评分、caspase-3表达，探讨阿司匹林对BMSCs移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的影响及作用机理。 方法： 利用线栓法制作SD大鼠大脑中动脉阻塞(Middle

cerebral artery occlusionMCAO)模型(n=48)。根据完全随机原则分为：模型自然恢复组（A组），BMSCs移植组（B组）、阿司匹林干预组（C组）和阿司匹林干预BMSCs移植组（D组）。C、D组根据阿司匹林的剂量各分为三个亚组（阿司匹林剂量：C1、D1亚组3.75mg/kg/d，C2、D2亚组7.5mg/kg/d，C3、D3亚组22.5mg/kg/d），C、D组各亚组在再灌注120小时后开始按照分组每日予以不同剂量阿司匹林溶入0.5ml蒸馏水灌胃给药；A组为MCAO再灌注大鼠模型组；B、D组进行BMSCs移植，于缺血2小时再灌注146小时后，通过尾静脉注射2×106BMSCs每只大鼠。第14天，分别检测血清TNF-α浓度，评价神经行为学评分， 很少 HE染色观察细胞形态结构，测定caspase-3的表达。

结果： 1．神经行为学评分（单位：分）:A组3.76±0.42，B组2.04±0.28，C组：C1亚组3.91±0.35、C2亚组3.83±0.62、C3亚组3.92±0.60，D组：D1亚组1.69±0.16、D2亚组1.17±0.11、D3亚组2.25±0.17。A组与B组及D组各亚组相比具有统计学差异（P<0.05），B组高于D组各亚组；C组各亚组与D组各亚组按剂量两两相比均具有统计学差异（P<0.05），C组高于D组；C组各亚组间两两相比有统计学差异（P<0.05），C1组最高，C3组最低；D组各亚组间两两相比有统计学差异（P<0.05），B组高于D组各亚组；D组各亚组间两两相比有统计学差异（P
目的：近年来，血管性痴呆(vascular dementia, VD)的发病率逐年增高，已成为严重威胁老年人身心健康的原因之一，并给社会和家庭带来了沉重负担。因此，深入探讨VD的发病机制是当前医学界的研究热点。 研究表明脑源性神经营养因子（brain Androgen Receptor antagonist derived neurotrophic factor,BDNF）作为神经生长因子的一种，在脑缺血时表达增高。其可通过与细胞膜表面的酪氨酸激酶受体B(receptor BI 2536体内 tyrosine kinases B, TrkB)结合而激活下游的PI3K-Akt信号通路。活化的Akt与其下游底物糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β, GSK3β）结合后，使GSK3β失活，发挥抗凋亡作用。但Akt、GSK3β在VD中如何发挥作用仍未明确。本研究通过对与学习记忆密切相关的海马组织病理学观察及细胞凋亡相关蛋白Akt、GSK3β表达变化的检测，以期明确Akt、GSK3β在VD中的作用，为探讨VD发病机制提供更多依据。 方法：本研究分为三部分： 第一部分以雄性C57Bl/6小鼠为研究对象，采用反复三次结扎双侧颈总动脉的方法，给予脑缺血20min(ischemia, I)-再灌注10min(reperfusion, R)处理，建立VD小鼠模型，并设立正常组、假手术组和模型组；在模型制备后的第15、29、43d，利用水迷宫试验和跳台试验对各组小鼠进行学习功能测试，在第16、30、44d进行记忆功能测试；行为学测试完毕后，HE染色观察海马组织病理学变化。

第二部分采用Western-blot方法测定小鼠海马组织Akt、p-Akt蛋白的表达变化。 第三部分采用Western-blot方法测定小鼠海马组织GSK3β、p-GSK3β蛋白的表达变化。 结果： 1术后3天小鼠体重变化 与正常组和假手术组相比，模型组小鼠术后第1d体重明显减轻(P0.05）。 2水迷宫试验 2.1术后第15、29、43d，测试各组小鼠学习成绩，结果显示： 2.1.1游完全程时间：正常组和假手术组相比无明显差异；模型组与假手术组相比时间明显延长(P<0.05)，其中以术后4周损害最严重，仅有少量细胞形态正常，正常神经元计数较术后2周和6周时显著减少(P0.05）；缺血再灌注后2周、4周、6周之间蛋白表达亦无明显变化（P>0.05）。 5.2p-Akt蛋白的表达情况： 正常组和假手术组之间无明显变化（P>0.05）。与假手术组相比，模型组p-Akt蛋白表达增高(P0.05）。 6Western-blot显示海马组织GSK3β、p-GSK3β蛋白表达情况 6.1GSK3β总蛋白的表达情况： 正常组、假手术组和模型组之间无明显变化（P>0.05）；缺血再灌注后2周、4周、6周之间蛋白表达亦无明显变化（P>0.05）。 6.2p-GSK3β蛋白的表达情况： 正常组和假手术组之间无明显变化（P>0.05）。与假手术组相比，模型组p-GSK3β蛋白表达增高(P0.

Despite these efforts, a high proportion of patients are diagnosed with advanced stage disease that is associated with poor outcomes, as CRC remains one of the leading causes of cancer-related deaths in the world. The development of next generation sequencing and collaborative multiinstitutional efforts to characterize the cancer genome has afforded us with a comprehensive assessment of the genomic makeup present in CRC. This knowledge has translated into understanding the prognostic role of various tumor somatic variants in this disease. Additionally, the awareness of the genomic alterations present in

CRC has resulted in an improvement in patient outcomes, largely due to better selection of personalized therapies based on an individual’s tumor genomic makeup. The benefit of various treatments is often limited, where recent Selleck PR 171 studies assessing the genomic diversity in CRC have identified the development of secondary tumor somatic variants that likely

contribute to acquired treatment resistance. These studies have begun to alter the landscape of treatment for CRC that include investigating novel targeted therapies, assessing the role of immunotherapy and prospective, dynamic assessment of changes in tumor genomic alterations 并且 that occur during the treatment of CRC.
中国原发性肺癌诊疗规范(2015年版)详细阐述肺癌的早期筛查、临床表现、影像学特征、内窥镜检查、实验室检查、病理分子学诊断和治疗进展,尤其是对治疗方案的深入阐释,对临床工作具有重要的指导意义。本文对该规范中的治疗方案作进一步解读。
玉兔临风,飘渺寰宇轮回,盘点江山,回首如烟笑慰。由本刊例行一年一度的肿瘤专家圆桌会议如期在京举行,出席会议的医药专家纷踏而至,会议主题锁定于肿瘤临床治疗学新进展——规范化、个体化和靶向化治疗。在孙燕院士的主持下,石远凯、林洪生、王洁教授分别就生物标志物在非小细胞肺癌预后和疗效预测中的作用、中医药防治肿瘤的进展、非小细胞肺癌规范化治疗等进行主题报告;孙燕院士依据国内、外多项循证医学结论,点评近10年来临床肿瘤学的进展,伴随对肿瘤认识的深入,临床肿瘤学发生着巨大变革,在分子生物学基础上的靶向治疗发展迅猛,治疗趋向规范化、个体化、中西融和、调控结合(扶正祛邪、同病异治、异病同治),正成为当今肿瘤治疗的主旋律。
1文献来源Mok TS,Wu YL,Thongprasert S,et at.Gefitinib or Carboplatin-Paclitaxel in pulmonary adenocarcinoma[J].N Engl J
针对表皮生长因子受体(EGFR)和血管生成(angiogenesis)信号通路的靶向治疗已经在晚期非小细胞肺癌的治疗上取得成功,但由于抗药性的存在,大多数晚期患者的生存时间仍然提高有限。继发性的EGFR

T790M突变和原癌基因肝细胞生长因子受体(MET)的扩增被鉴定为两种主要的抗药机制。最近转化生长因子-β(TGF-β)/白介素-6信号通路被报道能介导选择性和适应性地对erlotinib的抗药。另一方面,Kras突变所致肺癌的靶向治疗方面也取得了一些进展。双重抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和促分裂素原活化蛋白激酶激酶(MEK)信号通路可导致Kras突变肿瘤的显著消退,联合抑制SRC、PI3K和MEK可使丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶11(Lkb1)缺失,Kras突变的肺癌小鼠的肿瘤明显消退,抑制核因子-κB(NF-κB)信号通路导致p53缺失,Kras突变的肿瘤发展显著减慢。这些发现都为发展非小细胞肺癌患者的靶向治疗提供了有力的支持。
Lung Osimertinib售价 cancer is the leading cause of cancer death worldwide,with large variation of the incidence and mortality across regions.Although the mortality of lung cancer has been decreasing,or steady in the US,it has been increasing in Asia for the past two decades.Smoking is the leading cause of lung cancer,and other risk factors such as indoor coal burning,cooking fumes,and infections may play important roles in the development of lung cancer among Asian never smoking women.The median age of diagnosis in Asian patients with lung cancer is generally younger than Caucasian patients,particularly among never-smokers.

明确CCN2的受体整合素α_νβ_3在增生性瘢痕组织、瘢痕成纤维细胞中的表达调控机制。 2.明确MAPK信号通路在CCN2调控增生性瘢痕中的具体作用，初步探讨其作用机制，并在兔耳瘢痕模型中进行验证。 【研究内容】 1.检测CCN2的受体整合素α_νβ_3在增生性瘢痕组织、瘢痕成纤维细胞中的表达情况。 2.检测在CCN2诱导增生性瘢痕成纤维细胞转分化过程中，其相应标志性分子的表达变化情况，整合素αν、整合素β3受体分子的表达变化；应用整合素α_νβ_3的特异性阻断剂LM609，观察其在增生性瘢痕成纤维细胞转分化过程中作用，并用三维凝胶收缩实验检测增生性瘢痕成纤维细胞收缩功能的改变。

3.使用CCN2刺激增生性瘢痕成纤维细胞后，采用免疫印迹的方法，观察MAPK信号通路的激活情况；通过应用该信号通路的特异性阻断剂，检测增生性瘢痕成纤维细胞转分化标志分子表达特性的变化；用CCN2或与TGF-β1联合刺激正常真皮成纤维细胞，观察其α-SMA、胶原Ⅰ及胶原Ⅲ表达的变化；采用免疫印迹、免疫组织化学的方法，观察磷酸化ERK及JNK在增生性瘢痕中的表达情况；构建兔耳增生性瘢痕模型，观察CCN2与MAPK阻断剂的作用。 【研究结果】 1.通过检测发现，增生性瘢痕组织中整合素αv、整合素β3受体的表达水平显著上调；而且，在增生性瘢痕成纤维细胞中，整合素αv、整合素β3受体的表达水平也显著上调。

Selleck Galunisertib 2. CCN2作用增生性瘢痕成纤维细胞后，α-SMA、胶原Ⅰ及胶原Ⅲ的表达均明显升高，整合素αv、整合素β3受体的表达水平也显著上调；应用整合素α_νβ_3的特异性阻断剂LM609，可以明显抑制CCN2诱导增生性瘢痕成纤维细胞后α-SMA、胶原Ⅰ及胶原Ⅲ的表达；三维凝胶收缩实验显示，LM609可以显著抑制增生性瘢痕成纤维细胞的收缩功能。 3.使用CCN2刺激增生性瘢痕成纤维细胞后，可诱导细胞中ERK1/2、p38、JNK信号通路的磷酸化，其中ERK1/2、JNK信号通路的磷酸化至15min时达到高峰，p38信号通路的磷酸化至30min达到高峰，通过应用其特异性阻断剂PD98059、SB203580、SP600125，可以显著抑制CCN2所诱导MAPK信号通路的磷酸化。 4.应用PD98059后，可明显抑制CCN2所导致的胶原ⅠmRNA的表达。然而，应用SB203580和SP600125后，对CCN2所导致的胶原ⅠmRNA的表达未见明显抑制作用；Western-blot结果显示，在应用这3个阻断剂后，CCN2所诱导的Ⅰ型胶原表达被抑制，并且PD98059的抑制效果最强。在对增生性瘢痕成纤维细胞分泌胶原的水平进行检测时发现， 寻找更多 PD98059和SP600125可明显降低CCN2所导致的Ⅰ型胶原分泌，而SB203580对CCN2所导致的Ⅰ型胶原分泌未见明显的抑制作用。 5. Western-blot结果显示，CCN2作用增生性瘢痕成纤维细胞后48h，α-SMA的表达明显升高，在应用SB203580，SP600125或PD98059预处理后，α-SMA表达的升高可被明显抑制，且PD98059组的作用最为明显。细胞免疫荧光结果显示，CCN2作用48h后，增生性瘢痕成纤维细胞中α-SMA的表达明显升高，而SP600125或PD98059预处理后，α-SMA的表达显著下调，且PD98059组的作用最为明显，但应用SB203580预处理后，α-SMA的表达升高未被明显抑制。

6.应用TGF-β1+CCN2联合处理后，可以使正常成纤维细胞中α-SMA、胶原Ⅰ及胶原Ⅲ的表达明显升高，CCN2单独处理时未见明显变化，而且在应用TGF-β1Ⅰ型受体的特异性阻断剂SB431542预处理后，可显著降低TGF-β1与CCN2联合作用所导致α-SMA、胶原Ⅰ及胶原Ⅲ表达的升高，而且Western-blot的结果显示，单独应用SB431542预处理后，与对照组相比可以抑制正常成纤维细胞中胶原Ⅰ及胶原Ⅲ的表达。 可能 7.采用Western-blot及免疫组织化学的方法，我们发现与正常皮肤组织相比，增生性瘢痕组织中磷酸化ERK和JNK的表达均明显升高。 8.在体内试验中，我们成功构建兔耳增生性瘢痕模型，发现与对照组相比，SP600125或PD98059处理组，兔耳瘢痕质地较柔软平整，可明显抑制兔耳瘢痕的增生，而且单独应用CCN2并不能加重瘢痕的增生程度；胶原染色发现，对照组、PBS处理组、CCN2处理组胶原纤维致密粗大，真皮层较厚，胶原纤维排列紊乱；CCN2+SP600125组、CCN2+PD98059组、PD98059组及SP600125组，真皮层亦增厚，但较对照组、PBS组、CCN2组薄，胶原纤维排列较整齐，胶原纤维较稀疏。 【研究结论】 1.与自体正常皮肤及正常真皮成纤维细胞相比，增生性瘢痕组织及增生性瘢痕成纤维细胞中整合素αv、整合素β3受体的表达水平均显著上调。 2. CCN2作用增生性瘢痕成纤维细胞后，可以诱导其发生转分化，并且在这个过程中CCN2的受体整合素α_νβ_3发挥重要作用。 3. CCN2可以明显激活MAPK信号通路，外源性的抑制ERK1/2、JNK信号通路，可显著抑制CCN2所诱导的α-SMA、Ⅰ/Ⅲ型胶原的表达。 4.

01)；14d达高峰(P＜0.01)；以后维持在较高水平，至35d仍明显高于A组(P＜0.01)。C组：TGF-β_1 mRNA的表达从1d至35d均较B组减弱(P＜0.05)；但所有时间点仍高于A组(P＜0.05)。 6．治疗前后染毒大鼠肺组织NF-κB活性的动态变化：A组大鼠肺组织NF-κB活性很低。B组大鼠肺组织NF-κB活性1d开始较A组显著升高(P＜0.01)；3d时达高峰(P＜0.01)；7d及14d时仍高于A组(P＜0.01)。C组NF-κB活性较B组明显减弱(P＜0.01)；在1d时最高，以后逐渐下降，在14d时与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。 Fludarabine分子重量 7．染毒大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白的变化：A组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白表达较少。B组大鼠肺组织磷酸化p38MAPK蛋白1d开始较A组显著升高(P＜0.01)；3d时达高峰(P＜0.01)；以后逐渐下降，21d及以后与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。C组磷酸化p38MAPK蛋白表达1d至14d时较B组明显减弱(P＜0.01)；仅1d至7d时高于对照组(P＜0.05)；在14d时与A组相比无统计学意义(P＞0.05)。

结论：应用MT治疗，可明显降低百草枯中毒大鼠血清MDA含量，增加SOD及GSH-Px活力；减轻染毒大鼠肺组织早期的炎性改变及后期的肺纤维化趋势，这可能与MT较强的抗氧化功能以及降低肺组织NF-κB活性，减少TGF-β_1、磷酸化p38MAPK的表达，调节MMPs和TIMPs之间的平衡有密切关系。
第一部分高糖对培养的人脐静脉内皮细胞p38 MAPK信号系统表达的影响 目的:检测高糖对人脐静脉血管内皮细胞系p38MAPK信号系统表达的影响,从而探讨p38MAPK信号系统在高糖诱导糖尿病视网膜血管病变中的作用。 方法:以人脐静脉血管内皮细胞﹙HUVEC﹚为研究对象,模拟糖尿病状态,以高浓度葡萄糖刺激HUVEC,采用RT-PCR、Western-blot法检测细胞中p38MAPK、转化生长因子β2和基质金属蛋白酶活力和蛋白表达情况的变化,电镜观察超微结构及流式细胞仪检测细胞周期的变化。 结果:高浓度葡萄糖可使内皮细胞中p38MAPK、MMP-2和TGFβ2表达增加,超微结构及细胞周期发生变化。 结论:高糖诱导糖尿病视网膜血管病变可能部分通过p38MAPK信号系统表达增强。 第二部分p38 MAPK信号系统在实验性糖尿病仓鼠视网膜中的表达变化 目的:检测p38 MAPK信号系统在实验性糖尿病仓鼠视网膜中表达的变化,从而探讨p38 MAPK信号系统在糖尿病视网膜病变(diabetic

retinopathy DR)发生发展中的作用及其机制。 方法:用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导仓鼠糖尿病模型,HE染色观察光镜下视网膜的形态特征及变化,用免疫组织化学法检测正常对照组(非糖尿病动物组)和糖尿病动物模型组视网膜中TGF-β2的表达,电镜观察其超微结构的变化。血清学检测仓鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和电化学发光法检测胰岛素水平等变化。提取视网膜中总RNA,半定量RT-PCR观察视网膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ2 mRNA表达情况,Western-blot检测糖尿病仓鼠视网膜中p38 MAPK、MMP-2和TGFβ2蛋白情况。 结果:糖尿病仓鼠不仅表现为高血糖,还表现为高TG血症。糖尿病仓鼠视网膜内TGF-β2表达呈阳性染色反应,视网膜超微结构出现膜盘结构分层,数量稀少;节细胞层内质网扩张,核周间隙扩大,细胞内线粒体肿胀等变化。糖尿病仓鼠视网膜中p38 购买17-AAG MAPK、MMP-2和TGFβ2 mRNA表达呈升高趋势、蛋白表达增多,与正常对照组相比于造模后16周末时即差异具有统计学意义(P < 0.05)。 结论:此为研究p38 MAPK信号途径参与DR的发病机制提供了实验依据。
淋巴细胞作为免疫调节的中心环节,在炎症性肠病的发生和持久化中起重要作用。本课题采用半抗原诱发大鼠结肠炎模型,用蛋白质组学方法研究了淋巴细胞的蛋白表达差异谱。进一步研究了p38

MAPK信号通路在淋巴细胞免疫应答和细胞因子分泌中的作用。同时采用流式细胞术、RT-PCR及ELISA方法对中药肠泰有效部位治疗结肠炎的作用机制进行了研究。结果显示与细胞周期、增殖、信号转导、炎症、凋亡和代谢相关的蛋白分子参与了TNBS诱导的结肠炎中淋巴细胞的免疫应答过程。尤其是一系列与凋亡相关蛋白在结肠炎发病中起重要作用。P38 MAPK通路参与了TNBS诱发的结肠炎中肠系膜淋巴结T淋巴细胞免疫应答,该通路对IL-2、IFN-γ等细胞因子的表达进行了调控。中药复方肠泰有效部位可调节T淋巴细胞亚群比例、降低炎性介质和促炎细胞因子的分泌而发挥对结肠炎的抗炎和免疫调控作用,进而抑制炎症的发生。
近年来的研究证明,在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)的发病初期,病原体及代谢产物(如内、外毒素),尤其是炎症反应早期出现的细胞因子,可激活外源性凝血途径,导致弥漫性血管内凝血(DIC)。同时,疾病早期产生的大量凝血酶可促进血小板和中性粒细胞的聚集、黏附,加强内皮细胞和中性粒细胞之间的相互作用,加重炎症反应。在ALI/ARDS病程中原有的凝血与抗凝、纤溶与抗纤溶、炎症与抗炎之间的平衡被打破,凝血级联与炎症级联之间相互促进,形成一种自动放大的效应,使病情加重,为此干预凝血系统的异常对控制ALI/ARDS的病情发展具有重要意义。另外,ALI/ARDS时炎症反应的失控与p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路及核因子-κB selleckchem (NF-κB)的激活密切相关。已有研究证实了肝素除具备抗凝作用外,还有一定的抗炎、抗过敏作用,有关肝素对p38MAPK信号转导通路以及NF-κB活性影响的研究,国内外未见有相关报道。 目的:本实验拟应用目前常用的抗凝药肝素(包括低分子肝素)来治疗ALI/ARDS,同时,通过研究肝素对p38 MAPK信号转导通路及NF-κB活性的影响,进一步明确肝素对ALI/ARDS抗炎作用的分子机制。 方法:本实验采用新西兰大耳白兔48只,动物随机分为4组:对照组(A组)、内毒素组(B组)、内毒素+肝素组(C组)和内毒素+低分子肝素组(D组),每组12只。1.用大肠杆菌内毒素(LPS)制备大耳白兔急性肺损伤模型;2.用Nova Stst Profile M血气分析仪进行血气分析;3.用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度;4. ELISA法测定血清血管内皮粘附分子-1(sICAM-1)的浓度;5.Western blots检测多形核中性白细胞(PMN)中磷酸化p38 MAPK的含量;6.电泳迁移率变动分析实验(EMSA)测定肺组织中NF-κB活性;7.计算肺干重和湿重比值(肺D/W)及观察肺组织病理学改变。观察肝素对ALI/ARDS的疗效,并通过研究肝素对TNF-α、sICAM-1表达、p38 MAPK基因信号转导通路、NF-κB活性的影响来进一步探讨其抗炎作用的分子机制。 结果: 1.

多酚化合物BJA3121抑制肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的人单核白血病

THP-1细胞与人肺癌A549细胞粘附采用荧光显微镜方法测定荧光素标记的人单核白血病细胞系THP-1与贴壁生长的A549细胞粘附。多酚化合物BJA3121以40μg/ml分别预处理A549细胞6,12和24h后,对TNF-α (25ng/ml)刺激A549肺痛细胞4h后诱导的THP-1与A549细胞的粘附有显著的抑制作用。在荧光显微镜下,可观察到粘附细胞在药物处理的三个时间点都明显减少,而且处理24h后的作用强度大于6h和12h,作用呈现时间依赖性。当BJA3121以20,30和40μg/ml分别预处理A549细胞12h后,对TNF-α刺激A549肺癌细胞诱导的THP-1与A549细胞的粘附呈现剂量依赖性的抑制作用。 selleck化学药品 二.多酚化合物BJA3121及其类似物BJA32531和BJA32515对人肺癌A549细胞和肝癌HepG2细胞生长的影响 采用MTT和CCK-8方法测定多酚化合物抗A549细胞和HepG2增殖活性。结果表明,多酚化合物BJA3121以5.0,10.0,20.0和40.0分别处理A549细胞24、48和72h后,均未观察到药物对细胞有生长抑制作用,说明BJA3121在有效抑制细胞粘附的剂量范围内对人A549细胞无细胞毒作用。但BJA3121及其类似物BJA32515和BJA32531在相同条件下,对人肝癌HepG2细胞显示细胞毒性。

三.多酚化合物BJA3121抑制TNF-α诱导的A549细胞的白细胞介素和粘附趋化因子基因的表达 我们研究了多酚化合物BJA3121对细胞因子IL-8和IL-6以及粘附因子MCP-1, ICAM-1和MMP-9表达的影响。采用实时定量荧光PCR技术检测细胞因子IL-8和IL-6以及粘附趋化因子MCP-1,ICAM-1和MMP-9的mRNA表达。 1.BJA3121抑制TNF-α诱导的A549细胞IL-8mRNA的表达 采用实时定量荧光PCR技术检测A549细胞IL-8基因的表达。多酚化合物BJA3121以10,20,30和40μg/ml剂量和TNF-α NVP-BKM120分子量 (25ng/ml)一起预处理A549细胞6h,然后检测细胞中IL-8mRNA的表达。结果表明,在正常情况下,A549细胞中有少量IL-8mRNA的表达；而TNF-α单独刺激A549细胞6h后,细胞中IL-8基因的表达呈现显著性增加。BJA3121从10-40μg/ml的四个剂量均能抑制TNF-α诱导的A549细胞的IL-8mRNA的高表达,且抑制作用呈剂量依赖性。 2.BJA3121抑制TNF-α诱导的A549细胞IL-6mRNA的表达

采用实时定量荧光PCR技术检测A549细胞IL-6基因的表达。多酚化合物BJA3121以20和40μg/ml剂量和TNF-α 并且 (25ng/ml)一起预处理A549细胞6h,然后检测细胞中IL-6mRNA的表达。结果表明,在正常情况下,A549细胞中有少量IL-6mRNA的表达；TNF-a单独刺激A549细胞6h后,细胞中IL-6基因的表达呈现显著性增加。BJA3121在20和40μg/ml的两个剂量均能抑制TNF-α诱导的A549细胞的IL-6mRNA的过表达. 3、BJA3121抑制]TNF-α诱导的A549细胞MCP-1mRNA的表达,但对ICAM-1和MMP-9mRNA的表达无影响 采用实时定量荧光PCR技术检测A549细胞MCP-1, ICAM-1和MMP-9mRNA的表达。多酚化合物BJA3121以20和40μg/ml剂量BJA3121和TNF-α (25ng/ml)一起预处理A549细胞6h,然后检测细胞中MCP-1,ICAM-1和MMP-9mRNA的表达。结果表明,在正常情况下,A549细胞中均有少量MCP-1,ICAM-1和MMP-9mRNA的表达；而TNF-α(25ng/ml)单独刺激A549细胞6h后,细胞中三种因子的表达均显著升高。BJA3121在20和40的两个剂量均能抑制TNF-α诱导的A549细胞的MCP-1mRNA的过表达,抑制作用呈剂量依赖性。但另一方面,BJA3121对TNF-α诱导的ICAM-1和MMP-9mRNA的表达无抑制作用。 四.BJA3121抑制TNF-α诱导的A549细胞IL-8的释放 采用人生物素化的IL-8抗体和HRP标记的亲和素的ELISA试剂盒检测A549细胞培养上清液中的IL-8水平。我们首先研究了TNF-α刺激A549细胞释放IL-8与TNF-α作用时间的关系。结果显示,无TNF-α处理的细胞上清液中IL-8的浓度为640±40pg/ml;而TNF-α以25ng/ml分别处理A549细胞3h、6h、12h、24h后,四个时间点的细胞上清液中IL-8的浓度分别为3898.3±300,34666.8±2212,43778.6±924和191255.

APN/CD13抑制剂抗HCC侵袭及新血管生成研究 目的：探讨APN/CD13抑制剂24F对HCC细胞侵袭和新血管生成的抑制作用 方法：选用人HCC细胞HuH-7和人脐静脉血管内皮细胞HUVEC,二者均表达APN/CD13。以L-亮氨酸对硝基苯胺为底物测定24F对APN/CD13酶活性的抑制作用。MTT法测定24F对HuH-7细胞增殖的抑制作用。Transwell细胞侵袭实验测定24F对HuH-7细胞侵袭和游走运动能力的抑制作用。微管形成实验测定24F对HUVEC细胞在Matrigel表面形成微管样结构的抑制作用。

AUY-922浓度 结果：化合物24F对APN/CD13酶活性的半数抑制浓度为1.88mM。24F在0-200μg/mL浓度范围内对HuH-7细胞的增殖具有轻微地抑制作用,未观察到该化合物对HuH-7有明显的细胞毒效应。体外细胞侵袭实验结果表明,24F能够减少穿过Matrigel的HuH-7细胞数目,显示其对肿瘤细胞侵袭和游走运动能力的抑制作用。24F能够在体外抑制血管内皮细胞HUVEC形成微管样结构,提示24F具有潜在的抑制肿瘤新血管生成的能力。 结论：APN/CD13抑制剂24F对HCC细胞侵袭和游走运动能力具有抑制作用,对血管内皮细胞HUVEC微管形成具有抑制作用,提示APN/CD13抑制剂在抗HCC侵袭转移及新血管生成方面具有潜在的应用价值。 第二节.APN/CD13抑制剂抗卵巢癌增殖及新血管生成研究 目的：探讨APN/CD13抑制剂LYP对卵巢癌生长增殖及新血管生成的抑制作用。 方法：体外实验选用人卵巢癌细胞株ES-2和SKOV-3以及人脐静脉血管内皮细胞HUVEC。三种细胞均表达APN/CD13,表达水平由高到低依次为ES2、

SKOV-3和HUVEC。MTT实验测定LYP对细胞增殖的抑制作用。台盼蓝实验检测LYP的细胞毒效应。以L-亮氨酸对硝基苯胺为底物测定LYP对APN/CD13酶活性的抑制作用。流式细胞术和Western blot实验分别测定LYP对细胞APN/CD13表达水平的影响。划痕实验和Transwell侵袭实验观察LYP对HUVEC细胞侵袭和游走运动能力的抑制作用。微管形成实验测定LYP对HUVEC细胞在Matrigel表面形成微管结构的抑制作用。裸鼠接种ES-2细胞后尾静脉给予LYP治疗两周,观察药物对ES-2肿瘤生长的抑制作用和裸鼠对给药方案的耐受性。CD34免疫组化实验测定LYP对ES-2肿瘤组织平均血管密度和平均血管直径的影响。Western blot实验测定LYP对肿瘤组织内APN/CD13、VEGF、bFGF和TGFa表达水平的影响。 结果：MTT实验结果表明LYP能够有效的抑制ES-2细胞的增殖。LYP对ES-2细胞APN/CD13酶的活性具有显著的抑制作用。相同浓度下,LYP对APN/CD13酶活性的抑制作用大于乌苯美司。相对于ES-2细胞,LYP对SKOV-3细胞增殖的抑制作用较弱,提示LYP对ES-2细胞增殖的抑制作用可能与抑制APN/CD13有关。流式细胞术实验和Western blot实验表明LYP能够降低体外培养ES-2细胞APN/CD13的表达水平。裸鼠接种ES-2细胞后尾静脉给予LYP,连续治疗两周,ES-2肿瘤的生长受到显著的抑制作用。Western blot实验结果显示LYP能够降低肿瘤组织APN/CD13的含量。与阳性对照药乌苯美司相比,LYP对ES-2肿瘤生长的抑制作用较强。裸鼠对给药方案的耐受性良好,给药组裸鼠的体重与阴性对照组比较没有显著性差异。 为进一步研究LYP抑制体内ES-2肿瘤生长作用背后的机制,我们检测了LYP在抑制新血管生成方面的药理活性。MTT实验和台盼蓝实验结果显示在5-80μM浓度范围内,LYP对HUVEC细胞没有明显的细胞毒效应。在该浓度范围内LYP对HUVEC细胞APN/CD13酶的活性有一定的抑制作用。Transwell侵袭实验和划痕实验结果显示LYP能够明显抑制HUVEC细胞的侵袭和游走运动能力。微管形成实验表明LYP对HUVEC细胞在Matrigel表面形成微管样结构具有抑制作用。LYP对新血管生成的抑制作用在体内实验中得到了验证。对ES-2肿瘤组织进行CD34免疫染色,结果发现LYP给药组肿瘤平均血管密度和平均血管直径均小于阴性对照组。在相同给药剂量下,LYP抑制新血管生成的作用大于阳性对照药乌苯美司。LYP的抗微血管生成作用可能与其抑制与血管生成有关的分子的表达有关。Western

Dinaciclib订单 blot实验结果显示,LYP给药组肿瘤组织内VEGF、bFGF和TGF-a的水平显著低于阴性对照组。 结论：LYP在体外和体内对卵巢癌细胞生长增殖具有较强的抑制作用,该作用可能与其降低细胞APN/CD13表达水平和抑制新血管生成有关。
目的：检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)、分化型胚胎软骨表达基因1(differentiated embryo-chondrocyte expressed gene1,DEC1)、分化型胚胎软骨表达基因2(differentiated PD-0332991订单 embryo-chondrocyte expressed gene2, DEC2)、低氧诱导因子1a(Hypoxia-inducible factorla,HIF1a)、信号转导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcripton3, STAT3)及血管内皮生长因子(vascular endothelia growth factor,VEGF)信号传导分子在癌和癌旁组织的表达,探讨信号分子各自表达和不同表达模式与临床特征的关系及不同信号传导分子之间的关联。 材料与方法：选取了75例肺腺癌病人,标本收集时未进行任何治疗。病人年龄37-84岁,中位年龄为61岁；男性41例,女性34例；肿瘤直径≤3cm20例,>3cm55例；无淋巴结转移35例,有淋巴结转移的40例；有远处转移的5例,无远处转移的70例；高分化4例,中分化33例,低分化38例；TNMl期9例,TNM2期46例,TNM3-4期20例。采用免疫组织化学技术进行EGFR、DEC1、DEC2、HIF1α、STAT3及VEGF蛋白表达的检测,不同分子表达的阳性判定采用相应的评分标准；应用SPSS11.