2%,在Abcbl;Abcg2基因敲除小鼠这一数值仅增加至14.4%。这些结果可能是由GSK126较差的膜渗透性导致的,因而本论文质疑GSK126的临床有效性。虽然本实验所检测的EZH2抑制剂都是ABCB1和ABCG2的转运底物,这一特性限制了这些化合物进入脑实质的能力和潜在的脑胶质瘤治疗效果,但是我们认为EPZ-6438是这一系列化合物中最适合用于治疗脑胶质瘤的EZH2抑制剂。第二部分抑制ABCBl和ABCG2可提高威罗菲尼治疗黑色素瘤脑转移瘤疗效在过去几十年里,黑色素瘤发病率逐年上升。Ⅳ级黑色素瘤患者发生脑转移的概率在40%以上,这是导致黑色素瘤患者死亡的主要因素之一。威罗菲尼作为BRAF蛋白抑制剂,是目前治疗黑色素瘤最有效的化疗药物之一。由于威罗菲尼是ABCB1和ABCG2的转运底物,因此威罗菲尼口服利用率和脑内累积量明显受到这两个转运蛋白限制,从而降低了其疗效,尤其是对黑色素瘤脑转移灶的疗效。基于以上研究背景,我们在应用威罗菲尼治疗黑色素瘤脑转移小鼠模型的时候,同时应用ABCB1和ABCG2特异性抑制剂-依克利达,以观察该联合用药方法能否增加威罗菲尼的疗效。我们首先将黑色素瘤细胞注射入WT小鼠,Abcb1和Abcg2基因敲除鼠脑内,制成黑色素瘤脑转移小鼠模型。然后给予不同剂量的威罗菲尼或联合应用依克利达,研究其药代动力学及疗效。本研究发现,口服威罗菲尼24小时后,尽管WT小鼠血浆内浓度比Abcbla/1b;Abcg2-/-小鼠血浆浓度仅低了1.4倍,但脑内浓度却比基因敲除鼠低了700多倍。依克利达可以提高威罗菲尼的口服利用率和脑通透能力,但是WT小鼠脑内浓度仍低于基因敲除鼠脑内浓度20多倍。表明ABCB1和ABCG2显著抑制威罗菲尼渗透入脑,依克利达虽然可以显著提高威罗菲尼渗透入脑的能力,但是并不能完全逆转ABCB1和ABCG2对其限制作用。利用没有BBB限制的皮下肿瘤模型时,我们发现10

www.selleck.cn/p53.html 获悉更多 mg/kg威罗菲尼对Abcbl a/1b;Abcg2-/-小鼠的疗效与25mg/kg威罗菲尼对WT小鼠的疗效几乎是一致的。利用脑转移模型我们发现,ABCBl和ABCG2显著抑制了威罗菲尼对脑转移黑色素瘤的治疗作用,而依克利达可以一定程度地提高威罗菲尼的疗效。另外我们还发现一个有趣的现象：在开始用药的时候,基因敲除鼠颅内肿瘤对药物反应比较敏感,肿瘤体积不再增大。但是用药一周或两周之后,肿瘤不再对威罗菲尼有反应,肿瘤迅速增长。我们试图去探讨该肿瘤在如此短的时间内获得耐药性的机制。但很不幸的是我们利用免疫组织化学、Western和PCR等多种方法检测相关信号通路,均未明确找出该耐药性的产生机制。本实验研究表明ABCBl和ABCG2明显的限制了威罗菲尼对黑色素瘤脑转移瘤的治疗效果,联合应用其抑制剂依克利达可以增强其疗效,但仍不足以完全逆转该限制作用。
研究背景转移性乳腺癌约占乳腺癌的30-40%,恶性程度高,5年生存率低,是人类难治的恶性肿瘤之一。它病程进展迅速但常无明显的临床表现,难以早期发现因而错过根治的机会。这些患者在进展期往往只有少数患者可以接受手术治疗,而化疗是其主要的治疗手段。以紫杉类为主的治疗是转移性乳腺癌的一线治疗方案,特别是在对蒽环类耐药的情况下。临床试验证实单药多西他赛与丝裂霉素联合长春新碱相比可以明显提高总生存率,提高缓解率,延长疾病进展期。另外,尽管紫杉醇和多西他赛两种紫杉类药物均用与转移性乳腺癌的治疗,在总生存率及疾病进展时间上多西他赛获益更多。Albain等人发现吉西他滨与紫杉醇联合用药疗效优于紫杉醇单药治疗。在我们的研究中,通过体外培养乳腺癌细胞来研究短链神经酰胺与多西他赛联合作用对乳腺癌的治疗疗效。神经酰胺,主要存在与细胞膜结构中,是脂类家族的结构蛋白。作为信使分子,神经酰胺也能引起凋亡。许多研究表明:神经酰胺与肿瘤细胞的凋亡有关,增加内源性神经酰胺的产生可以诱发凋亡。可溶性的短链神经酰胺在许多肿瘤细胞株中表现出抗肿瘤作用,例如黑色素瘤,软组织肉瘤,Jurkat白血病,头颈部鳞状细胞癌。我们课题研究要点是神经酰胺是如何增加化疗制剂的疗效。我们的前期实验发现C6神经酰胺联合多西他赛可以增加多西他赛的抗乳腺癌疗效,并且发现C6神经酰胺联合多西他赛引起乳腺癌细胞大量凋亡,并与AMPK通路的活化有关。它涉及的分子机制有待进一步深入的研究。研究方法和材料人乳腺癌细胞MCF-7,MDA-231,均从上海生命科学研究所(上海,中国)购买,乳腺癌原代细胞取自外科手术中乳腺癌患者的肿瘤组织,各细胞在RPMI/DMEM培养基中(Simga公司,圣路易斯,密苏里州),加入10%的FBS(Sigma公司,圣路易斯,密苏里州),青霉素/链霉素(1:100,Sigma),培养37℃CO2培养箱中。细胞给予C6神经酰胺和多西他赛处理,显微镜下观察细胞形态,运用MTT方法检测细胞存活率,同时对细胞进行台盼蓝染色,计算活细胞率;运用Annexin

哪里 V试剂盒检测细胞凋亡,通过Western blot检测总的和磷酸化的AMPKα、ACC、信号水平的改变;运用程序性死亡抑制剂及凋亡抑制剂进一步验证C6神经酰胺和多西他赛诱导细胞死亡方式。建立AMPKα1-sh RNA及AMPK-α1显性失活(DN)突变(DN-AMPK-α1)c DNA稳转的肿瘤细胞,运用上述方法进一步验证信号通路的改变。为了了解线粒体通透性转换孔(m PTP)在协同用药对乳腺癌细胞的作用,通过JC-10染料测定细胞线粒体膜电位(MMP),FACS检测ROS生成,通过Western blot检测细胞色素C,C-caspase3,JNK,HER-1/2,Akt/Erk信号通路等,了解线粒体通路的改变,并通过MPTP抑制剂及ROS清除剂等方法来验证线粒体通路作用及相关信号通路改变。建立CYP-D-sh RNA稳转肿瘤,Cyp-D过表达乳腺癌细胞进一步验证C6神经酰胺和多西他赛诱导细胞死亡的信号通路改变。统计学处理在每个实验中,至少使用三个孔/平皿。每个实验重复至少三次,每次获得具有相似的结果。数据以均数±标准偏差(SD)。使用SPSS15.

L-1SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理能抑制CoCl2对p-ERK1/2表达的上调作用。结论活性氧激活的ERK1/2通路介导CoCl2对PC12细胞的损伤作用,并与p38MAPK通路存在相互的的激活作用。
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated

点击此处 protein kinase,MAPK)是细胞内广泛表达的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,经磷酸化激活,参与多种细胞反应的调节,如细胞增殖、分化、凋亡及细胞周期调控等[1]。MAPK信号通路是重要的信号传导途径,肿瘤
AIM: To describe the role of resistin in liver fibrosis. METHODS: For the in vivo animal study, Sprague Dawley rats were subjected to bile duct ligation (BDL) for 4 wk. Rat liver, adipose tissue (epididymal fat) and serum were analyzed for resistin expression. For the in vitro experiment, rat primary hepatic stellate cells (HSCs) and Kupffer cells (KCs) were used. HSCs were exposed to recombinant resistin, and collagenⅠ, transforming growth factor β1, α smooth muscle actin, tissue inhibitor of metalloproteinase 1 and connective tissue growth factor expression were analyzed. Resistin gene and protein expression was quantified as was the expression of pro-inflammatory cytokines including tumor necrosis factor α (TNFα), interleukin (IL)-1, IL-6, IL-8 http://www.selleckchem.cn/products/PF-2341066.html and monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1). The effects of resistin on HSC proliferation, migration and apoptosis

were determined. The effects of resistin on KCs were also investigated. RESULTS: Following BDL, rat epididymal fat and serum rather than liver showed higher resistin expression compared to control rats. In liver, resistin was expressed in quiescent HSCs and KCs. Resistin treatment resulted in enhancement of TNFα , IL-6 , IL-8 and MCP-1 gene expression and increased IL-6 and MCP-1 protein in HSCs. Resistin activated HSC phospho-MAPK/p38, and p38 inhibition diminished IL-6 and MCP-1 expression. Furthermore, resistin facilitated HSC

proliferation and migration, but decreased apoptosis which was via an IL-6 and MCP-1 mechanism. Finally, resistin-induced transforming growth factor β1 from KCs enhanced HSC collagenⅠexpression. CONCLUSION: Resistin directly and indirectly modulates HSC behavior towards a more pro-fibrogenic phenotype.
低氧诱导因子抑制药(YC-1)是一种小分子物质,最初研究主要集中在心血管系统,如抗血小板聚集、收缩血管等方面。研究发现,YC-1能抑制低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,从而开启YC-1在抗肿瘤方面的研究。YC-1抗肿瘤作用是多方面的,包括细胞周期抑制和诱导肿瘤细胞凋亡、抗血管生成、抗炎性反应及抑制金属蛋白酶类(MMPs)等。
近年的研究使我们认识到骨关节炎(OA)是在机械性和生物性因素共同作用下,关节软骨细胞、细胞外基质与软骨下骨的合成与分解的生理平衡失调的结果。多种炎症介质、基质成分和机械刺激共同作用于关节细胞从而导致关节软骨的分解代谢明显大于合成代谢,这些介质都是通过特异性地与其受体结合传递信号进入细胞核,启动基质金属蛋白酶(MMPs)和炎症基因的转录和表达来发挥作用的。因此通过研究相关的细胞信号转导通道,揭示OA的发病机制并从中找寻有效的治疗靶点,为研发有效防治OA的药物开辟了新的思路。在本文中作者以文献回顾的方式,总结在OA发生发展过程中与其相关的主要信号通路的研究进展。
目的了解在H2O2氧化应激模型中,p38在人皮肤成纤维细胞凋亡中的作用。方法实验分为3组,即对照组,氧化组,抑制剂组。氧化组给予终浓度为730μmoL Pimasertib核磁共振 H2O2刺激12 h;干预组在同样刺激前用p38抑制剂SB203580与细胞共培养1 h。分别在刺激后的10 min和1 h用Western Blot方法检测p38蛋白含量。在刺激后的12 h,用比色法检测Caspase-3活性,用Hoechst 33342荧光染色、流式细胞分析仪检测细胞凋亡。结果刺激10 min后,氧化组P-p38明显高于对照组和抑制剂组,刺激1 h后,P-p38未检测出。刺激12 h后,Ho-echst 33342荧光染色氧化组出现明显的细胞凋亡形态学改变,抑制剂组凋亡比例低于氧化组;氧化组Caspase-3活性明显增强,抑制剂组低于氧化组。流式细胞仪显示对照组,氧化组,抑制剂组细胞凋亡比例分别为(4.20±1.25)%,(30.01±8.94)%,(15.56±3.

01g为载体,NGF3000AU (mNGF), FK506 10mg共同混匀于蒸馏水中,真空冷冻干燥备用。将PLGA(75：25,分子量：20000)用三氯甲烷配置成10%溶液。按0.1gPLGA:3000AU NGF:10mg FK506:0.01gBSA的比例加入以上配置好的冻干粉,用磁力搅拌器混匀。利用溶剂挥发法制备规格为长12mm、厚0.3mm、宽8mm的缓释膜；将膜置于乙醇溶液中2h快速提取剩余的三氯甲烷以及单体或低聚物,去离子水冲洗5min,真空至恒重备用。 或者 将制备的NGF、FK506/PLGA缓释膜置于装有2ml的含1%BSA的PBS溶液密闭Ep管中,37℃孵育48小时。随后在新配介质溶液中孵育释放1小时,然后取出复合缓释膜,作ELISA检测。测完后缓释膜重新被置于新配介质中孵育,每三天检测一次释放量。 参照Dument和Sondell化学萃取法制备去细胞细胞外基质的方法并在此基础作部分改进。具体操作步骤如下：(1)取双侧坐骨神经约1.2cm,剥除外覆结缔组织,Hank’s液清洗3次；(2)入3%Triton-X-100(三硝基甲苯)中浸泡24h后Hank’s液清洗3次；(3)入4%脱氧胆酸钠中室温下震荡24h后Hank’s液清洗3次；(4)如上重复(2)、(3)中步骤;(5)Hank’s液4℃中保存备用;(6)更换保存液每周1次。

成年SD雄性大鼠30只,体重200±20g,制备单侧(左侧)坐骨神经缺损(10mm)模型,并随机分成3组(每组10只)：A组：以NGF/FK506缓释膜复合AECM复神经缺损；B组：单纯应用AECM修复神经缺损；C组：自体神经吻合修复神经缺损。戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉后,取左后肢后外侧切口,暴露坐骨神经,A、B组均于梨状肌下3mm处向远端锐性切除8mm坐骨神经,待其自然回缩,制备大鼠10mm坐骨神经缺损。10-0无损伤缝合线显微镜下将AECM桥接缝合,其中A组将缓释膜完全包裹神经桥接区,并间断缝合。C组于梨状肌下3mm锐性切除10mm,在显微镜下按血管走行原位端端缝合。

分别于术后4周、8周、12周进行大体观察对比,12周时通关神经电生理测定、组织学观察、和电镜观察对比大鼠神经缺损的再生情况。结果应用单因素方差分析进行统计学比较。实验数据采用spssl2.0统计学软件处理,取P
目的: 本研究旨在观察降钙素(calcitonin,CT)对白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)诱导后大鼠早期骨性关节炎(osteoarthritis,OA)体外模型关节软骨细胞的丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路中的细胞外信号调节激酶(extracell-ular sigal-regulated protein kinase,ERK)和p38激酶(p38 NVP-AUY922小白鼠 点击此处 kinase,p38)及其磷酸化水平和基质金属蛋白酶-13 (matrix metalloproteinase-13,MMP-13)表达的影响,探讨CT是否可以通过影响MAPKs信号通路蛋白的激活进而减少MMP-13产生,从而对OA软骨细胞损伤起到一定的预防作用。 方法: 1.软骨细胞的培养及鉴定:取健康SPF级1月龄Sprague-Dawley(SD)大鼠的膝关节表面软骨组织,经消化后培养软骨细胞。采用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原(collagen

typeⅡ,ColⅡ)免疫细胞化学方法鉴定软骨细胞。 2.第2代软骨细胞在融合后分为6组:空白组(A组);给予DMEM培养液24h15min;IL-1β组(B组):先给予DMEM培养基24h后再加入10ng/mlIL-1β15min;CT低剂量预防组(C组):先给予含CT50ng/ml DMEM培养基24h后再加入10ng/mlIL-1β15min;CT高剂量预防组(D组) :先给予含CT500ng/mlDMEM培养基24h后再加入10ng/mlIL-1β15min;CT低剂量对照组(E组):给予含CT50ng/ml DMEM培养基24h15min ;CT高剂量对照组(F组):给予含CT500ng/mlDMEM培养基24h15min。免疫细胞化学方法和Western blot方法分别检测各组中MAPKs通路中的ERK和p38激酶及其磷酸化水平和MMP-13的表达情况。采用ANOVA方差分析进行组间均数比较,两两比较采用SNK检验,以P0.05)。 3.2 p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值:B组p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值高于其它各组,差异有统计学意义(P0.05);A,E和F组之间p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。 4. Western blot结果: 4.1 ERK1/2和P38 OD值:各组ERK1/2和P38 OD值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。 4.2 p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值:B组p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值高于其它各组,差异有统计学意义(P0.05);A,E和F组之间p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值分别比较,差异均无统计学意义(P>0.

METHODS: Human embryonic stem cells (hESC) differentiated to cardiomyocytes (CM) using a p38 MAPK inhibitor (SB203580) based serum-free medium (SB media). Nutrient supplements known to increase cell viability were added

to SB medium. The ability of these supplements to improve cardiomyogenesis was evaluated by measurements of cell viability, total cell count, and the expression of cardiac markers via flow cytometry. 因为 An improved medium containing Soy hydrolysate (HySoy) and bovine serum albumin (BSA) (SupSB media) was developed and tested on 2 additional cell lines (H1 and Siu-hiPSC). Characterization of the cardiomyocytes was done by immunohistochemistry, electrophysiology and quantitative real-time reverse transcriptionpolymerase chain reaction. RESULTS: hESC cell line, HES-3, differentiating in SB medium for 16 d resulted in a cardiomyocyte yield of 0.07 ± 0.03 CM/hESC. A new medium (SupSB media) was developed with the addition of HySoy and BSA to SB medium. This medium resulted in 2.6 fold increase in cardiomyocyte yield (0.21

± 0.08 CM/hESC). The robustness of SupSB medium was further demonstrated Rocilinostat using two additional pluripotent cell lines (H1, hESC and Siu1, hiPSC), showing a 15 and 9 fold increase in cardiomyocyte yield respectively. The age (passage number) of the pluripotent cells did not affect the cardiomyocyte yields. Embryoid body (EB) cardiomyocytes formed in SupSB medium expressed canonical cardiac markers (sarcomeric α-actinin, myosin heavy chain and troponin-T) and demonstrated all three major phenotypes: nodal-, atrial- and ventricular-like. Electrophysiological characteristics (maximum diastolic potentials and action potential durations) of cardiomyocytes derived from SB and SupSB media were similar. CONCLUSION:

The nutrient supplementation (HySoy and BSA) leads to increase in cell viability, cell yield and cardiac marker expression during cardiomyocyte screening assay differentiation, translating to an overall increase in cardiomyocyte yield.
目的探讨乳凝集素通过ERK、p38 MAPK信号通路对未成熟树突状细胞(iDCs)分泌白介素(IL)-12和IL-10的影响。方法脐带血中分离得到单核细胞,加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(50 ng/mL)和重组人白介素-4(10 ng/mL),同时按照不同组合加入乳凝集素(10μg/mL)和信号通路阻滞剂,诱导分化为iDCs。分组如下:①对照组;②乳凝集素组;③ERK通路阻滞组;④ERK通路阻滞剂+乳凝集素组;⑤p38MAPK通路阻滞组;⑥p38MAPK通路阻滞剂+乳凝集素组;⑦JNK通路阻滞组;⑧JNK通路阻滞剂+乳凝集素组。采用Western blotting检测ERK、JNK、p38MAPK蛋白磷酸化水平,ELISA法检测iDCs分泌IL-12和IL-10的变化。结果与对照组比较,乳凝集素组ERK蛋白磷酸化水平升高(P0.05),IL-12和IL-10的分泌量显著降低(P<0.05)。ERK通路阻滞组和ERK通路阻滞剂+乳凝集素组中ERK蛋白磷酸化水平几乎为零;ERK阻滞剂+乳凝集素组IL-12和IL-10的分泌量显著高于乳凝集素组(P<0.

选择通过PCR扩增后确定的疤痕组织内有变化的PDGF-B作为切入点:

通过免疫组化,RT-PCR,Western Blot,细胞培养,RNA干扰,抗体封闭等技术来研究PDGF-BB在SCI中的作用和可能的作用机制。 【结果】 1.本实验成功建立了OEC、SC、NSC、BMSC和HSC的体外培养方法,并进行了鉴定。 2.运动功能评分:所有大鼠脊髓全横断后,双侧后肢完全瘫痪,不能排尿。大鼠靠前肢拖动身体前行。1周末时,手术损伤组大鼠双后肢开始出现1个后肢关节(踝关节)的轻微活动。细胞移植组则开始出现1或2个后肢关节轻微活动(多为膝关节或/和踝关节)。在第2周末时,手术损伤组和细胞移植组大鼠在细胞移植后排尿障碍均较第1周末时稍有好转,膀胱残余尿仍较多,手术损伤组部分大鼠开始出现2个后肢关节的轻微活动,而细胞移植组部分大鼠开始出现1或2个后肢关节大幅运动。各细胞移植组的大鼠BBB评分在整个恢复的过程中均有明显的提高,但变化最明显的的就是OECs+NSCs组。说明OEC+NSC移植对运动功能恢复明显改善。 确认细节 3.神经电生理感觉和运动诱发电位检测 3.1 CSEP检测 N1波变化:脊髓全横断组没有测到波形,潜伏期无限延长,与假手术组比较差异显著;说明手术切断脊髓后上行传导通路明显受损。细胞移植后,OEC、NSC移植组均分别能测到N1波,其与SCI组相比较,有显著性统计学差异(P=0.001,≤0.001、P=0.045,＜0.05)。但OEC+NSC移植组分别与OEC组和NSC组比较,均无统计学差异(P=0.720、0.323,＞0.05)。说明OEC+NSC移植对感觉神经生理功能恢复改善不明显。 P1波变化:脊髓全横断组亦没有测到波形,说明潜伏期无限延长,与假手术组比较差异显著;然而OEC、NSC移植组能测到P1波,其与SCI组完全消失的情况相比较,差异显著,P=0.001,≤0.001;然而,需注意的是,仅OEC移植组P1波的潜伏期较与假手术组比较明显延长,有统计学差异;而NSC移植组P1波的潜伏期与SCI组相比较,P=0.069,＞0.05,无统计学差异;OEC+NSC移植组P1波的潜伏期与OEC组和NSC组的相比较,P值分别为0.688、0.247,＞0.05,无统计学差异。进一步说明OEC+NSC移植对感觉神经生理功能恢复改善不明显。 3.2 MEP检测: 本实验中,假手术大鼠均能测到明显的诱发电位,这种诱发电位的波幅为均值在6mv左右,潜伏期5ms左右。而SCI后,波幅和潜伏期均测不到,MEP消失。但给予NSC或者OEC移植后,均能测到MEP。只是其潜伏期有些延长(说明传导速度减慢),且恢复波幅明显降低(说明突触功能受损)。细胞联合治疗对MEP没有明显影响。

还有 4.植入细胞的存活:脊髓切片上可见到GFP标记的绿色荧光细胞。而联合移植组脊髓既可见绿色荧光细胞,又可见Hochest33342标记的细胞核。标记细胞在损伤脊髓瘢痕,及其上段、下端均可见到。说明移植细胞向头、尾侧迁移,并在宿主脊髓存活。 5.PCR扩增疤痕组织的神经营养因子及其受体,和凋亡相关因子的表达变化发现:①在疤痕组织中均未检测到BDNF、NT-3、bFGF、TrkA、TrkB表达;②NGF各时间点均没有变化。③凋亡基因变化:Bcl-2:在联合移植21d时与NSC移植组比较明显降低,P=0.011,＜0.05,差异有统计学意义;Caspas-3:联合移植组在14d与NSC移植组、OEC移植组相比较,明显增加(P=0.039、0.032,＜0.05),差异有显著统计学意义;但至在21d时,联合移植组与NSC移植组比较Caspas-3表达明显减P=0.006,＜0.01,差异有显著统计学意义;在28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。Bax在联合移植组14d时与NSC移植比较,明显增加,P=0.031,＜0.05,差异有统计学意义;但至21d时,联合移植组与手术组比较明显减少,P=0.040,＜0.05,差异有统计学意义;在28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。④NTF变化:CNTF在联合移植14d时,与OEC移植组及NSC移植比较表达明显增加,P值分别为0.007、0.001、0.023,均＜0.05,差异有显著统计学意义;在21d,联合移植组与NSC移植组比较明显减少,P值为0.000,＜0.01,差异有显著统计学意义;在28d,联合移植组与OEC移植组、NSC移植组比较均明显减少,P值分别为0.028、0.028,均＜0.05,差异有显著统计学意义。IGF-1:在14d时,联合移植组与OEC移植组及NSC移植比较,明显增加,尸值分别为0.003、0.001,均＜0.05,差异有显著性统计学意义;而在21d和28d时,各处理方式之间比较,差异均无统计学意义;PDGF-B:在14d时,联合移植组、OEC、NSC移植与手术组比较,明显减少,P=0.044,＜0.05,差异有统计学意义;联合移植组与NSC移植比较,明显减少,P=0.047,＜0.05,差异有统计学意义。在21d时,联合移植组与NSC移植组、OEC移植组及手术组比较明显减少,P=0.039、0.039、0.031,＜0.05,差异有统计学意义。在28d时,联合移植组与OEC移植组之间比较显著减少,P=0.011,＜0.05,差异有统计学意义。TGF-betal:在14d时,联合移植组与NSC移植组、OEC移植组和手术组比较明显增加,p=0.001、0.019、0.001,＜0.05,差异有统计学意义;而在21d和28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。Trkc:在14d时,联合移植组与NSC移植组比较,明显降低,P值分别为0.031,＜0.05,差异有统计学意义;在21时,联合移植组与手术组比较(P=0.015,＜0.05),和NSC移植组比较(P=0.010,＜0.05)。差异有统计学意义,而在28d时,各处理方式之间比较,差异无统计学意义。

哪里 可以看出,PDGF-B是细胞移植促进损伤脊髓修复中变化最明显的分子,提示其可能是细胞移植改进功能可塑性相关的重要分子。 6.OEC+NSC移植对恒河猴SCI功能恢复的影响 6.1后肢运动功能评分:改良的Tarlov’s Method评分结果显示损伤侧、细胞联合移植侧评分均较假手术组明显降低,有统计学差异(P＜0.05)。第1周、第2周、第3周、第4周、第7周,OEE+NSE移植细胞联合移植侧Tarlov’s Method评分均明显高于损伤侧评分,均有统计学意义(P＜0.05)。 6.2移植细胞在宿主脊髓存活和迁移情况:在宿主脊髓可观察到大量荧光细胞,向头端或尾端迁徙;说明移植细胞在宿主脊髓存活,迁移。 6.3神经电生理: CSEP:SCI后各组动物的CSEP信号均消失。损伤侧N1波波幅明显低于损伤对侧,有统计学差异(P＜0.05);而NSC联合OEC细胞移植1个月,细胞联合移植侧N1波幅明显高于损伤侧,有统计学意义(P＜0.

05),MN组大鼠逃避潜伏期也明显延长(P0.05);第2天,三组大鼠的逃避潜伏期相互比较结果与第1天相同;第3天,PTZ组大鼠的逃避潜伏期与NC组比较明显延长(P<0.05),MN组大鼠的逃避潜伏期与PTZ组大鼠比较明显缩短(P0.05);第4天,三组大鼠逃避潜伏期相互比较结果与第3天相同。 MK-0518浓度 3大鼠海马Western blot结果PTZ组大鼠P-GSK-3β蛋白表达水平(0.246±0.115)较NC组(0.718±0.076)和MN组(0.670±0.079)明显降低(P0.05)。NC组(1.210±0.139)、PTZ组(1.013±0.046)、MN组(1.164±0.155)大鼠相互之间GSK-3β蛋白表达无统计学差异(P>0.05)。

4 GSK-3βmRNA在大鼠海马组织表达NC组(1.098±0.054)、PTZ组(1.149±0.046)和MN组(1.105±0.048)相互比较无统计学差异(P>0.05)。 5免疫组化结果GSK-3β在大鼠海马CA3区表达情况: GSK-3β在海马CA3区阳性细胞显示为棕褐色,主要在海马细胞的胞浆内表达,NC组(32.428±5.223)、PTZ组(31.571±4.391)和MN组(32.000±5.537)之间阳性细胞数相互比较无差异,无统计学意义(P>0.05)。 结论: 1戊四氮点燃慢性癫痫大鼠学习记忆能力受损,癫痫大鼠海马组织中P-GSK-3β蛋白表达降低,GSK-3β蛋白和GSK-3βmRNA表达无明显变化,提示P-GSK-3β可能参与了癫痫后认知功能障碍的发病机制。 2盐酸美金刚可明显改善癫痫大鼠的认知功能,可提高海马组织中P-GSK-3β蛋白表达水平,对GSK-3β蛋白和GSK-3βmRNA表达无影响,提示盐酸美金刚可通过调节GSK-3β的活性改善癫痫后认知障碍。
糖原合成酶激酶(Glycose synthase kinase 3, GSK3),是最初在糖原合成中发现的一个重要的丝氨酸／苏氨酸激酶,在细胞各种信号通路包括WNT通路,胰岛素敏感性调节,造血干细胞,细胞周期和凋亡,肿瘤细胞的存活中都扮演着重要的角色。GSK3具有两个由不同基因编码翻译的剪切体：GSK3α(51KD)和GSK3β(47kD)。llS调节蛋白复合物γ亚单位REGy(11S regulator complex gamma sub unit),是一类蛋白酶体激活因子,它能与20s蛋白酶体结合而参与泛素与ATP非依赖的蛋白降解。本文研究了蛋白酶体激活因子REGγ与糖原合成酶激酶GSK3p之间的相互作用。

首先,我们发现蛋白酶体激活因子REGγ能结合并降解糖原合成酶激酶GSK3p。过量表达REGγ会增加GSK3β降解,敲低REGγ会增加内源GSK3p蛋白水平。REGγ基因敲除小鼠MEF细胞内GSK3β蛋白水平也会增加。另外,REGγ能影响GSK3β蛋白在细胞内的定位。同时我们探究了REGγ降解GSK3β的机制。 然后,我们探究了REGγ与GSK3β之间的作用,所引起的细胞内生物学功能的变化。在REGγ敲低的细胞内,我们发现GSK3β蛋白水平上升,肿瘤抑制因子P53的Ser315位磷酸化修饰升高。已有报道表明GSK3β能磷酸化修饰p53的Ser315,而p53的Ser315磷酸化修饰能促进p53的转录活性,增加p53的泛素化降解。因此,REGγ可能通过GSK3β,间接参与P53的磷酸化修饰、转录活性及降解调控。同时我们发现GSK3β下游蛋白β-catenin蛋白水平降低。REGγ也有可能通过GSK3β间接调节β-catenin,从而调控β-catenin参与的肿瘤相关基因的转录。流式细胞仪FACS技术检测细胞周期和凋亡实验时,发现过量表达REGγ会抑制GSK3β诱导的细胞凋亡。

已经 综上所述我们主要研究了REGγ能结合并降解GSK3β蛋白,从而影响GSK3β下游蛋白的活性,生物功能和与之相关的肿瘤发生,并为以后研究GSK3β及其所参与的细胞信号通路提供一些线索。
目的： 探讨苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用和机制。 方法： 将PC12细胞分为四组：空白对照组,苯丙胺组(2mM),苯丙胺加NGF(神经生长因子)组,苯丙胺加SB216763组。各组培养24h后,采用倒置显微光镜,免疫荧光技术及免疫印迹法观察苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用以及对AKT/GSK-3β/CRMP-2信号通路的影响,并且观察该信号通路上游激活剂NGF和下游GSK-3β的抑制剂SB216763能否减轻苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用。 结果： 1.倒置显微光镜形态学结果：空白对照组PC12细胞膜光滑,边界清晰,胞体饱满,透光,多呈椭圆形或梭形,有两条或以上的细长突起,许多细胞的突起交织在一起形成网；苯丙胺组与空白对照组相比,细胞体萎缩,呈圆形,突起变短、消失(P<0.05),突起形成的网状结构消失；苯丙胺加NGF组和苯丙胺加SB216763组与苯丙胺组相比,突起长度增长(P0.05)。多巴胺免疫荧光技术观察PC12细胞,各组间细胞长度的变化与上述的基本一致,各组细胞胞体及突起内都有多巴胺激发的荧光,其中空白对照组细胞及突起内多巴胺荧光强度比其他各组的更强,苯丙胺组与其他各组相比,多巴胺细胞的数量有所减少。 Epothilone B 2.苯丙胺、NGF及SB216763对AKT/GSK-3β/CRMP-2信号传导通路中蛋白表达的影响： 1)TrkA和P-TrkA:苯丙胺组与空白对照组比较,TrkA和P-TrkA的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。苯丙胺加NGF组和苯丙胺加SB216763组P-TrkA的表达与苯丙胺组相比均增多,差异有显著性(P0.05)。 2)AKT和P-AKT:苯丙胺组与空白对照组相比,苯丙胺组P-AKT的表达减少,差异有显著性(P<0.05)。苯丙胺加NGF组和苯丙胺加SB216763组与苯丙胺组相比,P-AKT的表达增加,差异有显著性(P0.05)。 3)GSK-3β和P-GSK-3β:苯丙胺组与空白对照组相比,苯丙胺组P-GSK-3β表达减少,差异有显著性(P<0.05)；而苯丙胺组GSK-3β表达增加,差异有显著性(P<0.05)。苯丙胺加NGF组与苯丙胺组相比,苯丙胺加NGF组P-GSK-3β的表达增加有显著性(P0.05)。苯丙胺加SB216763组和苯丙胺组相比,苯丙胺加SB216763组P-GSK-3β的表达差异无显著性(P>0.05),苯丙胺加SB216763组GSK-3β表达减少,差异有显著性(P<0.05),苯丙胺加NGF组和苯丙胺加SB216763组与苯丙胺组相比,P-CRMP-2的表达均减少,差异有显著性(P0.

84±0.11μmol.mg~(-1).min~(-1)上升到1.68±0.07μmol.mg~(-1).min~(-1)(p＜0.01)，而K_m则由23.54±0.12mmol／L减小到20.86±0.13mmol／L(p＞0.05)。激酶抑制剂阻断表明Na~+，K~+-ATPase的磷酸化是ALR提高其转化效率的关键因素，其中以丝氨酸／苏氨酸残基磷酸化为主。抗ALR单克隆抗体能有效阻断ALR提高HepG2细胞Na~+，K~+-ATPase的酶活。

一般 荧光探针分析表明：ALR能提高线粒体膜电位，增加细胞内游离[Ca~(2+)]浓度，清除细胞内活性氧。ALR能减缓因Na~+，K~+-ATPase活性下降而造成的对细胞线粒体膜电位的抑制和细胞内游离[Ca~(2+)]浓度的下调，有助于细胞内活性氧的清除。 在分子水平上，在50μg／L～200μg／L范围内，ALR能够浓度—时间效应激活MAPK通路，最大激活时间是10min。以浓度效应方式上调细胞周期蛋白CyclinD1表达水平，降低p21表达，提高pRb磷酸化水平。即：ALR通过调控MAPK途径和细胞周期蛋白的作用促进HepG2细胞增殖。用奎巴因抑制Na~+，K~+-ATPase活性，能下调ALR引起的ERK磷酸化水平，上调p38的磷酸化；同时导致Cyclin D1蛋白下调，升高p21表达，pRb蛋白活性下降，表明其抑制了
背景与目的 购买GSK1363089 肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一；国内外研究结果显示导致HCC的主要危险因素包括了乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、黄曲霉毒素、家族遗传因素等，这些致肿瘤的内外因素可能通过引发机体原癌基因的激活或抑癌基因的失活、细胞周期的紊乱、细胞分化发乱异常、细胞凋亡障碍、信号转导路异常等等起作用；对HCC的信号转导通路的研究显示多种信转导通路的异常参与了HCC的发生与发展；MAPK作为信号从细胞表面到细胞核内部的一条重要的传递途径。有研究显示MAPK通路的异常可能参与了HCC的发生与发展。本研究拟对大鼠及人HCC的肝癌组织、癌旁组织、正常肝组织及大鼠HCC形成前的活检肝组织的MAPK通路的ERK1/2、JNK和p38基因mRNA的表达情况及蛋白质活性进行检测，以了解MAPK通路在HCC发生发展过程中的作用，为进一步防治HCC提供理论基础。 材料与方法 1) 实验材料： 实验大鼠80只，随机分为2组，实验组(AFB1组)为66只，对照组为14只。AFB1实验组大鼠24例发生HCC；对24例HCC大鼠的肝癌组织、癌旁组织及癌前定期活检肝组织；选取未出癌大鼠6例及对照组大鼠11例的同期活检肝组织；另外，收集52例人HCC患者的肝癌组织及癌旁肝组织、18例正常人肝脏组织作为实验材料。

2) 实验方法： 采用逆转录PCR(RT-PCR)、免疫印迹试验(Western Blotting)及免疫
扇贝多肽(PCF)是从海洋生物栉孔扇贝(Chlamys farreri)中得到的水溶性多肽。本文首先通过复制小鼠的地塞米松免疫抑制模型,采用免疫组织化学、MTT法和流式细胞仪的方法,探讨扇贝多肽在体内对胸腺细胞和外周血淋巴细胞增殖和分化的作用。在此基础上,通过正交设计实验方案,筛选出适宜的紫外线辐照参数,建立了紫外线对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的病理模型。实验设计分组为:对照组,紫外线照射模型组,紫外线+0.125%PCF组,紫外线+0.25%PCF组,紫外线+0.5%PCF组和紫外线+0.1%VitC组。通过采用MTT法检测淋巴细胞活性;透射电镜观察细胞超微结构的改变;琼脂糖凝胶电泳观察DNA条带特征性变化;酶生化法测定细胞胞浆内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量以及细胞抗超氧阴离子能力(A-SAC)和总抗氧化能力(T-AOC);流式细胞仪测定细胞凋亡率;Fluo-3-AM荧光染色测定细胞内游离[Ca2+]I的变化;Rhodamine

查看更多 123荧光染色测定线粒体膜电位(ΔψМ)的改变;免疫细胞化学检测细胞p53、Bcl-2、Bax基因蛋白的表达;PT-PCR检测c-fos mRNA和c-jun mRNA的表达;原位杂交检测细胞P21WAF1 mRNA、P38 mRNA的基因表达;琼脂糖凝胶电泳观察各组不加入或分别加入ERK抑制剂、JNK抑制剂和P38抑制剂后的DNA ladder的变化;western-blot检测磷酸化ERK、磷酸化JNK、和磷酸化P38的活性等方法,探讨在紫外线照射下,扇贝多肽(PCF)对小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的保护作用及机制。 实验结果表明,PCF腹腔注射能够明显增强小鼠胸腺淋巴细胞转化能力,并促进DEX处理小鼠外周成熟的淋巴细胞增殖;在紫外线强度为6.16mJ/cm2,照射时间为10秒的照射条件下,建立了紫外线对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞辐射损伤的病理模型;0.125-0.