This review analyzes Alisertib溶解度 the state-of-the-art treatments, promises

and limitations of targeted therapies, ongoing trials and future perspectives, including potential role of microR NAs as predictive biomarkers.
目的比较免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和荧光原位杂交(fluorescent in situhybridization,FISH)技术在检测肺腺癌中ROS1蛋白表达和融合基因的差异性和一致性,评估IHC在临床上的应用价值。方法应用IHC和FISH技术对332例肺腺癌中ROS1蛋白表达和融合基因进行检测,比较两者检测的结果和相关性,并探讨ROS1融合基因与临床病理特征之间的关系。结果 332例肺腺癌中FISH阳性者13例,阴性者319例,ROS1融合基因阳性率为3.9%;ROS1蛋白表达结果:0者312例,1+者2例,2+者5例,3+者13例,ROS1蛋白过表达率为6.0%;经FISH检测312例ROS1蛋白表达为0的标本无ROS1融合基因,2例1+的标本中也无ROS1融合基因;5例2+的标本中有2例ROS1融合基因,13例3+的标本中11例有ROS1融合基因;IHC检测0和1+、2+、3+标本FISH检测阳性符合率分别为0(0/314)、40%(2/5)和84.6%(11/13);IHC检测ROS1蛋白为2+~3+的标本中72.2%(13/18)显示ROS1融合基因,0~1+患者中无1例有ROS1融合基因(Kappa系数=0.831,P
[目的]研究c-Met抑制剂PHA665752联合5氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)对人结肠癌细胞SW620生长的抑制作用及机制。[方法]选取48只4周龄的雄性裸鼠皮下接种人结肠癌细胞SW620,建立裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组(2.5%二甲亚砜稀释液隔日用药)、5-Fu组(40mg/kg

5-Fu每隔3日给药)、PHA组(25mg/kg PHA665752隔日给药)、5-Fu+PHA组(40mg/kg 5-Fu每隔3日给药+25mg/kg PHA665752隔日给药)各12只。免疫组织化学SP法检测瘤体组织内的E-cadherin和Ki-67蛋白表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况。[结果]治疗结束时,5-Fu组、PHA组、5-Fu+PHA组3组裸鼠的体重和瘤体体积均明显低于对照组(P<0.05),且5-Fu+PHA组裸鼠的瘤体体积显著低于5-Fu组、PHA组(P<0.05)。5-Fu组、PHA组、5-Fu+PHA组3组裸鼠的E-cadherin蛋白OD值显著高于对照组(P<0.05);5-Fu+PHA组裸鼠的E-cadherin蛋白OD值显著高于5-Fu组、PHA组(P<0.05);5-Fu组、PHA组、5-Fu+PHA组3组裸鼠的Ki-67蛋白OD值显著低于对照组(P<0.05);5-Fu+PHA组裸鼠的Ki-67蛋白OD值显著低于5-Fu组、PHA组(P<0.05);5-Fu+PHA组裸鼠的AI值显著高于5-Fu组、PHA组(P<0.05)。[结论]c-Met抑制剂PHA665752联合5-Fu对人结肠癌细胞SW620生长的抑制有协同作用,其机制可能与上调E-cadherin、下调Ki-67表达有关。
目的建立对吉非替尼(gefitinib)耐受的NSCLC细胞株,并观察其药理学特性。方法采用HGF和浓度递增的gefitinib处理HCC827细胞以诱导细胞耐药;MTT法测试细胞活力和药物敏感性;克隆形成和Edu染色验证gefitinib对细胞的生长抑制作用;qRT-PCR和Western

没有 blot实验检测细胞中c-Met表达。结果 HGF的使用可缩短HCC827GR耐药细胞的诱导时间;gefitinib可明显抑制HCC827亲本细胞的细胞活力、克隆形成和细胞增殖,而对HCC827GR细胞的生长抑制作用很弱;HCC827GR细胞c-Met高表达,对c-Met抑制剂高度敏感。结论成功并高效诱导了对gefitinib耐药的HCC827GR细胞,该细胞生长依赖c-Met蛋白活性,对c-Met抑制剂较敏感,可作为c-Met抑制剂的表型筛选模型。
软组织肉瘤约占成人恶性肿瘤的1%,儿童肿瘤的10%。手术一直是局限性原发软组织肉瘤的首选治疗,近20年来随着术前和术后放疗的应用,手术已趋于保守且术后复发率降低,但仍有约40%~50%的患者最终会发生远处转移,另有约10%的患者在确诊时即已发生转移;化疗药物虽经过数十年的发展,但目前在软组织肉瘤治疗中常用的蒽环类药物、异环磷酰胺、顺
李进,教授、主任医师、博士生导师。复旦大学附属肿瘤医院肿瘤内科主任,胃癌多学科综合治疗组首席专家,复旦大学肿瘤医院临床药物研究机构负责人,上海市化疗质控中心主任。亚洲肿瘤分子靶向治疗继续教育委员会委员,国家卫生部肿瘤医师资格考试委员会委员,中国临床肿瘤学会秘书长。
晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的若干治疗方案及新靶向药物目前正在评价中。本文详细讨论了表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)抑制剂和EML4-ALK抑制剂在一、二线治疗NSCLC中的重要性,概述了分子检测(EGFR突变、KRAS突变、EML4-ALK融合基因、EGFR表达)的含义以及在NSCLC治疗领域的未来前景。
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目的探讨NSCLC组织中棘皮动物微管样蛋白4-间变淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因与切除修复交叉互补蛋白1(ERCC1)和核苷酸还原酶亚单位M1(RRM1)mRNA表达的关系。方法应用实时荧光定量PCR方法检测257例NSCLC组织中EML4-ALK基因以及ERCC1和RRM1 MI-773购买 mRNA的表达。结果 NSCLC组织中EML4-ALK融合基因阳性率占4.28%(11/257),在不吸烟患者中较高(P0.05);NSCLC组织中,EML4-ALK融合基因阳性与RRM1 mRNA表达水平无关(P>0.

After per-meabilization of muscle cells, the Gi3 antibody inhibited bombesin-induced smooth muscle cell contraction. RESULTS: Incubation of http://www.selleckchem.cn/products/Fludarabine(Fludara).html permeabilized circular muscle cells with PLC-β3 antibody could inhibit bombesin-induced contraction. H-7, chelerythrine (PKC inhibitor) and genistein (protein tyrosine kinase inhibitor) inhibited bombesin-induced contraction, but DAG kinase inhibitor, R59949, could not inhibit it. To examine which mitogen-activated protein kinase (MAPK) was involved in bombesin-induced contraction, the specific MAPK inhibitors (MEK inhibitor, PD98059 and p38 MAPK inhibitor, SB202190) were used. Preincubation of PD98059

blocked the contraction induced by bombesin in a concentration-dependent manner. However,

SB202190 had no effects on contraction. CONCLUSION: Bombesin-induced circular muscle cell contraction in cat esophagus is madiated via a PKC or a PTK-dependent pathway 已经 or p44/p42 MAPK pathway.
目的:观察p38MAPK信号转导通路在17β-雌二醇和雷洛昔芬促成骨细胞增殖和分化过程中的作用。方法:取第一继代BALB/c小鼠头盖骨成骨细胞,药物刺激组分别加入不同浓度17β-雌二醇或雷洛昔芬;含阻断剂组预先添加不同浓度的SB202190(p38MAPK的阻断剂)阻断信号转导通路,再加17β-雌二醇或雷洛昔芬,作用72h后用MTT法与PNPP法测定细胞的增殖能力和碱性磷酸酶活性。结果:加入雌激素或雷洛昔芬后,成骨细胞的增殖和分化明显增强,与空白对照组比较差异具有显著性意义(P<0·05);阻断p38MAPK信号转导通路后,细胞增殖分化受到明显抑制,与未阻断组比较差异具有非常显著性意义(P<0.01)。结论:p38MAPK在17β-雌二醇和雷洛昔芬诱导的小鼠成骨细胞的増殖和分化过程中发挥重要作用。
目的:观察牛磺酸(Tau)对烧伤后心肌细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:选健康W istar大鼠50只,随机分为对照组、烧伤组(造成30%TBSAⅢ度烧伤)、烧伤+牛磺酸组(烫伤后即刻腹腔注射牛磺酸,200 mg/kg)、烧伤+牛磺酸(Tau)+SB202190组及烧伤+SB202190组(烫伤后立即注射SB202190,10 mg/kg)。末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,放射免疫法测定TNFα含量,荧光分析法测定caspase-3活性及免疫组化分析心肌Fas、caspase-8、Bc l-2和Bax蛋白的表达。结果:烧伤组心肌细胞凋亡指数(18.69±2.47)显著高于对照组(0.48±0.05)(P<0.01)。Tau组和Tau+SB202190组心肌细胞凋亡指数分别为3.15±0.41和1.63±0.31,显著低于烧伤组。心肌TNFα、Fas、caspase-8和Bax蛋白表达及caspase-3活性均不同程度低于烧伤组(P<0.05)。结论:牛磺酸对烧伤后心肌细胞凋亡有较好的抑制作用,其机制可能是牛磺酸调控了部分凋亡相关基因的表达和减少TNF-α的生成。
AIM:To

examine the pathway related to the IL-1β-induced PD0325901 activation of mitogen-activated protein(MAP)kinases in cat esophageal smooth muscle cells.METHODS:Culture of the esophageal smooth musclecells from cat was prepared.Specific inhibitors weretreated before applying the IL-1β.Western blot analysiswas performed to detect the expressions of COX,iNOSand MAP kinases.RESULTS:In the primary cultured cells,although IL-1βfailed to upregulate the COX and iNOS levels,the levelsof the phosphorylated forms of p44/42 MAP kinase andp38 MAP kinase increased in both concentration-andtime-dependent manner,of which the level of activationreached a maximum within 3 and 18 h,respectively.The pertussis toxin reduced the level of p44/42 MAPkinase phosphorylation.Tyrphostin 51 and genistein alsoinhibited this activation.Neomycin decreased the densityof the p44/42 MAP kinase band to the basal level.Phosphokinase C(PKC)was found to play a mediatingrole in the IL-1β-induced p44/42 MAP kinase activity.In contrast,the activation of p38 MAP kinase wasinhibited only by a pretreatment with forskolin,and wasunaffected by the other compounds.

05）。 6.接受TKI治疗的患者共有38例，血浆EGFR突变者的疾病控制率（DCR）和客观缓解率（ORR）分别为90%（9/10）和60%（6/10），EGFR野生型患者的DCR和ORR分别为（53.57%，15/28）和（17.86%，5/28）。血浆EGFR基因是否突变，与TKI治疗疗效有关（DCR，P=0.059；ORR，P=0.019）。 7.接受TKI治疗的患者中，血浆KRAS野生型患者的DCR和ORR（66.67%，22/33；33.33%，11/33）高于KRAS突变患者（40%，2/5；0%，0/5）。但统计学差异不明显（DCR，P=0.337；ORR，P=0.295）。 8.接受TKI治疗的患者，总体中位PFS为6个月，EGFR基因19和21外显子突变的患者中位PFS为10.5个月，较EGFR野生型患者的中位PFS（5.1个月）显著延长，但统计学意义不明显（P=0.228）。KRAS突变的患者病情进展较快，其中位PFS仅为2.5个月，明显小于KRAS野生型患者的PFS（9个月），两组患者PFS具有显著统计学差异（P=0）。

结论： 1、晚期NSCLC血浆和组织中EGFR和KRAS基因突变具有高度的一致性，血浆样本可以作为组织样本的良好替代。 什么 2、焦磷酸测序技术具有操作简便、高通量检测的特点，与ME-PCR的结合可有效富集突变型EGFR基因，可以准确检测出血浆EGFR和KRAS基因突变，可用于筛选适合TKI治疗的NSCLC患者，有利于指导NSCLC患者的个体化用药。 3、晚期NSCLC组织中EGFR突变更多见于不吸烟的女性腺癌患者。组织中KRAS突变、血浆中EGFR及KRAS突变与临床病理特征间无显著统计学差异。 4、血浆EGFR突变是TKI治疗的敏感性指标，其PFS较长；血浆KRAS突变则预示患者预后较差，PFS较短，表明血浆EGFR和KRAS突变可以较好的预测晚期NSCLC患者TKI治疗的疗效和预后。
恶性肿瘤是威胁人类健康的重大疾病，其发病率逐年升高，因此抗肿瘤药物的研究一直被全世界所密切关注。近年来，随着分子生物学技术的发展和对发病机制从细胞水平、分子水平的进一步认识，以肿瘤发生发展信号通路中的关键酶为靶点，发现高效低毒的抗癌药物已经成为重要的研究方向。分子靶向治疗是通过靶向于特异性通路的治疗策略，可有效阻止肿瘤细胞的生长并降低对正常细胞的毒性。 蛋白酪氨酸激酶（PTK）与肿瘤信号转导的密切关系，被广泛地作为抗肿瘤药物的靶点。在各种受体酪氨酸激酶中，肝细胞生长因子受体（c-met）对促进细胞生长、降低细胞凋亡、改变细胞骨架功能、增加转移和其他生物学改变起关键作用。因此，靶向于HGF/c-met通路可改善依赖c-met的肿瘤的治疗。 本文根据小分子c-met抑制剂的构效关系，设计合成了16个多芳类的新化合物，并对其进行了初步的活性筛选。主要研究工作及结果如下：

1、总结小分子c-met抑制剂的构效特点，设计合成了16个以二苯醚为母核的新化合物。以二苯醚结构为母核，在醚键的间位或者对位以亚甲基形式连接不同的五元环，期望含有该结构的化合物在抑制肿瘤细胞的同时将有镇痛作用。在醚键的另一苯环的对位上通过氨基成酰胺接不同的侧链，以求获得较好的活性。 C59供应商 2、对合成的16个化合物进行c-met激酶抑制活性评价，在10μM浓度下，将所合成的化合物与阳性药物XL880进行了c-met抑制活性的对比，大部分化合物在10μM的浓度下对c-met都有一定的抑制作用。其中，抑制率在30%以上的有2个化合物：T05和T13；抑制率在20%-30%的有5个化合物：T08,

Sorafenib订单 T11, T12, T14, T16；抑制率在10%-20%的有4个化合物：T01, T06, T10, T15；抑制率在0-10%的有5个化合物：T02, T03, T04,T07, T09。 3、对构效关系进行了初步分析。对于多芳类化合物，引入不同的酰基侧链有不同的抑制活性。含有脲基取代的化合物均有较好的抑制率，其活性优于含环丙基二酰胺取代的化合物。在含环丙基二酰胺取代的化合物中，苯环上吸电子基的引入有利于活性的提高，且引入的吸电子基的数目与其对PTK的抑制活性成正比。
C-met蛋白是肝细胞生长因子(HGF/SF)的受体,一种由位于染色体7q31区的C-met原癌基因编码的蛋白产物,具有酪氨酸激酶活性,参与细胞信号传导、细胞骨架重排的调控,是参与细胞增殖、分化与运动的重要因素。多项研究已证实在肿瘤组织中C-met的过表达与肿瘤的浸润、转移及不良预后密切相关。但在结直肠癌组织中C-met蛋白的表达水平与结直肠癌的临床分期,病理分级,生存期等关系的研究结果尚存争议,可能与以往国内缺少专门用于检测福尔马林固定标本中C-met表达水平的特异性单克隆抗体有关。本实验选用鼠抗人C-met单克隆抗体,特异性结合福尔马林处理过的C-met受体胞外区,检测了结直肠腺瘤及不同临床分期、病理分级的结直肠癌病灶中C-met蛋白的表达情况。结合临床病理特征进行综合分析,研究C-met蛋白与结直肠癌病理学特征相关性及预后的关系。目的：(1)研究C-met在结直肠癌组织中的表达水平及其与临床病理特征的关系。 (2)分析探讨C-met表达改变与肿瘤发生、侵袭、转移的关系,为结直肠癌的预后判断及临床靶向治疗提供依据。(3)比较分析C-met单克隆抗体及国内常用的兔抗人C-met多克隆抗体在检测结直肠癌蜡块组织中C-met表达水平的差别。方法收集筛选78例不同临床分期及病理分级结直肠癌组织和6例结直肠腺瘤组织及详细临床及病理资料建立病例数据库。采用免疫组织化学染色方法检测结直肠癌组织中C-met表达水平,分析C-met的表达与结直肠癌临床病理特征的关系。进一步采用荧光免疫组化方法比较分析两种抗体的检测效能。结果(1)78例结直肠癌组织中C-met细胞浆染色结果：强阳性46例,弱阳性22例,阳性表达率分别为59%,28.2%；阴性10例(12.

Recent epidemiologic studies and clinical trials have shown consistently that Asian ethnicity is a favorable prognostic factor for overall survival in non-small cell lung cancer(NSCLC),independent of smoking status.Compared with Caucasian patients with NSCLC,East Asian patients have a much higher prevalence of epidermal growth factor receptor(EGFR) mutation(approximately

30% vs.7%,predominantly among patients with adenocarcinoma and never-smokers),a lower prevalence of K-Ras mutation(less than 10% vs.18%,predominantly among patients with adenocarcinoma and smokers),and higher proportion 为什么 of patients who are responsive to EGFR tyrosine kinase inhibitors.The ethnic differences in epidemiology and clinical behaviors should be taken into account when conducting global clinical trials that include different ethnic populations.
3年前棘皮动物微管相关类蛋白4(echinoderm microtubule-associated protein-like 4,EML4)与间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma 也许 kinase,ALK)融合基因被发现存在于部分非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中。该融合基因常见于不吸烟的肺腺癌患者,有其独特的病理学特征,可以诱导肿瘤生成。ALK抑制剂能够作用于该基因的下游信号传导通路并拮抗其促肿瘤生成活性。本文旨在介绍EML4-ALK基因的结构、功能、生物学特征、检测方法及其在肺癌诊断治疗中的意义。
本月全球药品研发进展取得成效的药物有40个,比上月增加8个,除进入Ⅲ期临床研究阶段的药品数量较上月减少2个外,进入注册和注册前研究阶段的药品数量均有不同程度的增加。
2010年全球生物制药行业研发总费用达674.1亿美元,其中研发投入前10名的制药公司占总投入10%以上。近年来新药研发投入居高不下主要受专利期满、行业并购等因素影响。
对非小细胞肺癌患者生存状况产生影响的因素很多,如体力状况(PS)、性别、年龄、分期、是否吸烟、种族,以及某些分子生物学特征等。一些与治疗无关的因素称为预后性因素;另外一些因素可用于预测治疗结果,称为预测性因素,如切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、表皮生长因子受体(EG-FR)突变、性别及组织学类型,其中组织学类型对治疗结果
2011年伊始,国际肺癌领域的一个大动作,是国际肺癌研究协会/美国胸科学会/欧洲呼吸学会联手在《Journal

of Thoracic Oncology》上公布了关于肺腺癌的国际多学科分类新标准。由于肺癌的异质性,同一治疗手段对肺癌的治疗效果往往是南辕北辙,由此,肺癌领域的临床研究和临床处理,重要的一环是对肺癌的分类和分期以尽量减少其异质性,从而达到治疗的归一性。从肺癌的分类历史看,分类逐渐从粗放型向精致型演进。先是上个世纪小细胞肺癌和非小细胞肺癌的简单分类,而后是早期、局部晚期和晚期的分类,接着是病理学家对各种亚型的进一步形态学分类。总体而言,这些分类基本是单学科的自娱自乐,并没有多学科的融会和贯通,特别是非小细胞肺癌的病理学分类几乎对治疗和预后没有重大的指导作用,以至于在相当长的一段时间内,临床医生只要依据非小细胞肺癌这一粗放的分类就可以进行无差别的治疗了,这也是半个世纪来肺癌治疗裹足不前的重要原因之一。进入了21世纪,新的诊断技术新的治疗药物特别是对肺腺癌分子生物学的深入了解,诞生了新的治疗模式,对肺癌的分类需求就显得特别迫切了。于是就有了这一由国际著名学会联手精心而作的肺腺癌新分类。作为这一新分类的审稿人之一,早在2008年我便接触到这一新分类的内容了,对其修订过程了解颇多,也见证了国际许多学者对这新分类的贡献,也可以说这是国际肺癌学界智慧的结晶。这样,在肺腺癌新分类发表之际,我便组织了广东省人民医院、广东省肺癌研究所的专家进行翻译和解读。实际上,一个新分类的生命力,更在于在实践中的应用和拓展,希望我们的解读,只是作为敲门砖,大家可以在更大的范围内自由翱翔,这样的解读也就达到目的了。
美国临床肿瘤学会(ASCO)近年会议发布了大量的阳性和阴性结果,一线治疗的非选择时代已经过去,维持治疗也应该加以选择,二线化疗、靶向治疗各有优势,辅助治疗仍为主导。同时应该重视生物标志物的重要性,生物标志物指导的靶向个体化治疗将大大改善晚期NSCLC患者的预后。
新药研究与开发FDA批准艾替班特用于治疗遗传性血管性水肿急性发作Shire药业宣布FDA已批准其艾替班特(icatibant,Firazyr)注射液上市,用于治疗18岁以上成人遗传性血管性水肿(HAE)急性发作。艾替班特治疗HAE急性发作的疗效和安全性已在双盲、随机、对照的FAST

还有 1、2和3的3次临床试验中评估,总共入选223名患者,平均年龄38岁,64%为女性,95%为白种人。近57%的患者
The advent of targeted therapies, combined with an unsustainable rate of failure in oncology drug development, has resulted in a number of new approaches to clinical trials.

本实验成功地建立了酶切富集PCR-焦磷酸测序检测NSCLC患者癌组织及外周血KRAS基因突变技术。酶切富集-PCR通过引入特异的限制性内切酶，能更有效地使KRAS突变基因得到富集；在此基础上，联合焦磷酸测序技术，能大样本、高通量、精确地检测KRAS基因突变，能有效为NSCLC患者是否适合TKI治疗提供实验依据，给患者带来最大获益及避免医疗资源的浪费。
肺癌是全世界癌症相关死亡的第一原因，而肺癌中大约80%是非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer, NSCLC），晚期NSCLC患者的5年生存时间小于15%。表皮生长因子受体（epidermal growth factor

receptor, EGFR）是第一个于非小细胞肺癌中筛选出的重要驱动基因，肿瘤细胞根据“EGFR通路”进行繁殖、增长与侵袭转移等生物学相关行为。多项III期临床试验研究证明，三磷酸腺苷(Association Tennis Professional,ATP)竞争性酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine Kinase Inhibitors, TKIs)已成为NSCLC患者伴有EGFR酪氨酸激酶区21与19外显子激活突变临床选择治疗的一线治疗方案。目前市场上EGFR-TKIs药物主要有埃克替尼、吉非替尼和厄罗替尼等。EGFR-TKIs具有抑制癌细胞生长、血管生成和侵袭转移等生物学行为，其主要通过竞争细胞内EGFR酪氨酸蛋白激酶区域的ATP结合部位，可逆性阻碍EGFR酪氨酸激酶的激活，达到抑制癌症生长的作用。肿瘤组织标本来源的DNA结合直接测序法已成为EGFR基因突变检测的“金标准”。进行EGFR基因突变检测需要获取满意的组织标本，但是临床实践中肿瘤组织样本的获得受到很多因素的限制，很多患者不能取得满意的组织样本进行EGFR基因突变检测。已有大量研究探讨利用患者外周血游离DNA替代组织标本来源的DNA检测EGFR基因突变的可能性。但是不同标本来源DNA中EGFR基因突变检测结果的一致性尚未明确。因此，本研究利用卡方检验法分析晚期NSCLC患者外周中EGFR基因突变与组织标本中EGFR基因突变结果的一致性，旨在探讨利用患者外周血游离DNA代替组织标本DNA检测EGFR基因突变的可靠性，以及分析其与临床病理基线的相关性，为不能进行组织EGFR突变检测的患者使用分子靶向治疗提供证据。本课题的第二部分采用卡方检验分析初治NSCLC患者肺原发灶组织样本EGFR基因突变情况，及其与患者的临床病理资料指标的关联性。以此来探讨可预测组织样本中EGFR基因突变的临床指标，以期达到利用临床指标取代组织标本EGFR基因突变检测可能性，对于部分难以获取肿瘤组织标本进行EGFR基因突变检测的患者，利用临床指标筛选出对TKIs治疗效果较好的有利人群，为临床实现TKIs诊疗提供一定的理论证据。约有25%-54%NSCLC患者在肿瘤细胞进展阶段会发生脑转移。有研究表明NSCLC脑转移发生可能与其EGFR突变相关，但NSCLC脑转移对肺原发灶EGFR突变的预测作用，目前尚无报道。因此，本研究最后拟通过临床样本和离体实验进一步探讨NSCLC脑转移与肺原发灶EGFR突变的关联性，利用NSCLC脑转移预测肺原发灶EGFR基因突变状况，为未能进行EGFR突变检测伴有脑转移的NSCLC患者使用EGFR-TKIs治疗提供一定的证据，为筛选EGFR-TKIs治疗有效的优势人群提供理论依据。

Pazopanib体内 哪里 研究目的 1.探讨NSCLC患者外周血来源的游离DNA中EGFR激活突变与石蜡组织配对样本来源DNA中EGFR基因突变检测结果的一致性，旨在探讨利用患者外周血游离DNA代替组织标本DNA检测EGFR基因突变的可靠性，外周血EGFR基因突变与患者临床特征的关联性，为不能进行组织EGFR突变检测的患者使用分子靶向治疗提供证据。 2.研究初治NSCLC患者肺原发灶组织样本EGFR基因突变状况，及其与患者临床病理资料指标的相关性，利用临床指标代替EGFR基因突变检测，从未能进行EGFR基因突变检测的初治NSCLC患者中筛选出使用分子靶向治疗效果较好的有利人群，为实现患者个体化TKIs治疗提供一定的理论依据。 研究伴有脑转移初治NSCLC患者特有的临床特征与肺原发灶组织样本EGFR基因突变的相关性，从未能进行EGFR基因突变检测且伴有脑转移的初治NSCLC患者中筛选出对分子靶向治疗治疗有效的有利人群。 3.研究NSCLC患者发生脑转移对肺原发灶组织样本EGFR基因突变的相关性，利用NSCLC脑转移预测肺原发灶EGFR基因突变状况，为未能进行EGFR基因检测且伴有脑转移的NSCLC患者采纳TKIs治疗提供一定的证据。 研究方法与内容 1. NSCLC患者血浆与组织样本中EGFR基因突变状况的比较

收集第三军医大学附属大坪医院肿瘤中心2011年6月至2013年12月446例经病理确诊为非小细胞肺癌患者的临床资料。采用DHPLC技术检测446例患者外周血中EGFR基因突变，Sanger直接测序技术检测从446例中筛选出40例配对组织标本EGFR基因突变。卡方检验分析血浆与组织中EGFR基因突变的一致性及其与患者临床特征的关系。 2.初治NSCLC患者肺原发灶EGFR基因突变状态与其临床病理特征的相关性研究 收集2011年7月至2013年5月第三军医大学第三附属医院肿瘤中心253例初次就诊的NSCLC临床病理资料。使用ARMS法（人类EGFR基因突变荧光PCR检测试剂盒）检测253例患者的肺原发灶组织样本EGFR基因突变。并用X2方法分析肺原发灶EGFR基因突变状态及其与253例NSCLC患者临床特征之间的关联性。 AZD8055小白鼠 253例初治NSCLC中有31例出现脑转移，收集脑转移灶特有的临床资料，运用卡方检验方法分析肺原发肿瘤EGFR基因突变与患者脑转移患者特有的临床特征之间的关系。 3. NSCLC脑转移与肺原发灶EGFR基因突变状况的相关研究 显微镜观察EGFR基因野生型A549人肺腺癌细胞与EGFR基因19外显子缺失突变型HCC827细胞形态学差异；采用MTT方法比较A549与HCC827细胞增殖差异；应用细胞体外侵袭实验Transwell技术判断两株细胞侵袭水平的高低。 4.所有EGFR基因突变与临床基线之间的关系应用卡方检验（Chi-square tsst,X2）检验或Fisher确切概率法以及Logistic回归分析。P＜0.05为有统计学意义。所有分析用SPSS16.0软件包完成。两种不同细胞株MTT OD值、两种细胞侵袭个数、两种细胞迁移数目的比较采用one-wayAOVA分析。 研究结果 1. NSCLC患者血浆与组织样本中EGFR基因突变状况的比较 446例血浆总样本与40例组织样本中EGFR基因突变率各为19.7%，37.5%两者之间有统计学意义（P=0.

利用免疫细胞化学和Western Blotting方法检测未处理的食管癌EC9706细胞中PKA催化亚基、CREB的磷酸化状态,同时用PKA特异性的抑制剂H89处理细胞2 h,观察活化的PKA、CREB的改变。 2.利用免疫细胞化学和Western Blotting方法检测未处理的食管癌EC9706细胞中p38MAPK、ATF2的磷酸化状态,同时用p38抑制剂SB203580处理细胞2 h,观察活化的p38、ATF2的改变。 3.PKA特异性的抑制剂H89和p38抑制剂SB203580单独和联合处理EC9706细胞16 AZD4547化学结构 h,利用免疫细胞化学和Western Blotting方法观察DNA polβ表达的变化。 4.提取未处理EC9706细胞、H89和SB203580分别处理16 h的EC9706细胞的核蛋白,经凝胶电泳阻滞实验(EMSA),分析EC9706细胞中活化的CREB、ATF2与DNA polβ启动子中CRE元件的结合活性。 结果 1.EC9706细胞中PKA-CREB通路处于激活状态 Western Blotting与免疫细胞化学结果显示,未处理的EC9706细胞中含有活化的PKA和CREB,H89可以降低其磷酸化水平。

2.EC9706细胞中p38-ATF2通路处于激活状态 Western Blotting与免疫细胞化学结果显示,未处理的EC9706细胞中含有活化的p38和ATF2,抑制剂SB203580可以降低其磷酸化水平。 3.EC9706细胞中激活状态的PKA和p38MAPK通路参与调节DNA polβ的表达 为证实EC9706细胞中PKA、p38MAPK通路的激活与DNA polβ的表达存在一定的关系,我们采用阻断信号通路的方法,分别单独和联合使用PKA抑制剂H89和p38抑制剂SB203580作用EC9706细胞16 h,观察DNA

polβ的表达的变化。免疫细胞化学和免疫印迹实验结果显示,未处理的EC9706细胞中有一定水平的DNA polβ的表达,H89和SB203580可以部分降低细胞中polβ的表达,两者联合使用,polβ的表达降低更明显。EMSA结果显示,EC9706细胞中活化的CREB、ATF2与polβ启动子中的CRE元件有较强的结合活性。 第二章阻断DNA polβ表达的信号通路对食管癌EC9706细胞生物学特性和对顺铂敏感性的影响 方法 1.PKA特异性抑制剂H89和p38MAPK特异性抑制剂SB203580单独和联合处理EC9706细胞24 h,用倒置显微镜观察细胞形态学变化;用Annexin V-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率;水溶性四氮唑(WST-8)测定抑制剂作用24和48 h细胞增殖改变。 寻找更多 2.在EC9706细胞中加入H89和SB203580单独和联合预处理1 h,再加入顺铂培养24 h,用倒置显微镜观察细胞形态学变化;用Annexin V-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率;WST-8测定抑制剂作用24和48 h细胞增殖改变。 结果 1.阻断PKA和p38信号通路、降低DNA polβ表达对食管癌EC9706细胞生物学特性的影响 H89和SB203580单独作用EC9706细胞,部分细胞出现细胞形态缩小,细胞增殖减慢;当H89和SB203580联合作用,EC9706细胞出现细胞形态缩小,胞质凝缩,细胞漂浮数明显增加,细胞数量下降,增殖受到抑制。 细胞增殖实验结果显示,与对照组相比,H89组和SB203580组细胞的24 h、48 h存活率均下降(P＜0.05),当H89与SB203580共同作用于细胞时,细胞存活率进一步下降(P＜0.05)。 Annexin V-FITC和PI双染色,细胞凋亡检测结果显示,EC9706在H89和SB203580单独作用24 h,均表现为促进细胞凋亡;当H89和SB203580联合使用时,促进细胞凋亡和坏死作用更加显著。 2.阻断PKA和p38信号通路、降低DNA polβ表达增加食管癌EC9706细胞对顺铂的敏感性 化疗药顺铂单独作用EC9706细胞,出现细胞形态缩小,漂浮细胞数量增加,细胞增殖较慢;当H89和SB203580分别与顺铂联合作用,EC9706细胞出现细胞形态缩小,胞质凝缩,细胞漂浮数明显增加,细胞数量下降,增殖明显受到抑制,而H89、SB203580共同联合顺铂使用时,这种变化尤为明显。 很少 细胞增殖实验结果显示,与单用顺铂相比,当H89或SB203580与顺铂联合作用于细胞时,细胞存活率下降,细胞的增殖受到抑制(P＜0.05),增加了对顺铂的化疗敏感性;当三者联合,抑制更明显。

细胞凋亡检测结果显示,与单独使用顺铂的对照组相比,当H89或SB203580联合顺铂使用时,细胞总凋亡率增加(P＜0.05);尤其是H89、SB203580和顺铂三者联合时更明显。 结论 1.一定浓度的AOH能够产生抑制细胞增殖、引起细胞周期阻滞、造成DNA损伤等急性反应和和克隆形成率增加,并能够诱导DNA polβ表达增高。 2.AOH诱导NIH3T3细胞中的PKA-CREB信号通路和p38MAPK-ATF2信号通路激活,上调DNA polβ基因表达。 3.在食管癌细胞EC9706中PKA-CREB信号通路和p38MAPK-ATF2信号通路处于激活状态,两者共同促进DNA polβ的表达。 4.阻断PKA和p38MAPK信号途径,降低DNA polβ表达,改变EC9706细胞生物学特性,增加对化疗药顺铂的敏感性,有可能成为食管癌治疗的辅助治疗方法。
第一章人膀胱移行细胞癌中HIF-1α、VEGF、MMP-2和Bcl-2的表达及其相关性的研究 目的：探讨HIF-1α、VEGF、MMP-2和Bcl-2在BTCC中的表达及其意义。 方法：用免疫组化的方法检测HIF-1α、VEGF、MMP-2和Bcl-2在42例BTCC和9例正常膀胱组织中的表达情况,并分析其与BTCC临床病理因素的关系。 结果：BTCC组织中HIF-1α, VEGF, MMP-2和Bcl-2的阳性率分别为61.9%(26/42),69.0%(29/42),61.9%(26/42)和64.3%(27/42)高于正常膀胱组织的22.2%(2/9)(P<0.01),YC-1组和YC-1+SB203580组比较亦有显著性差异(P<0.01)；缺氧培养环境下,则分别为0.346±0.009,0.128±0.009,0.201±0.008,0.221±00007,YC-1组和YC-l+PD98059组比较有显著性差异(P<0.

Consequently, this pathway is commonly deregulated in cancer. In particular, mutations in the gene PIK3CA that encodes the p110α catalytic subunit of the PI3K enzymes result in cell proliferation and resistance to apoptosis in vitro and induce breast

tumors in transgenic mice. These data underscore the 点击此处 role of this pathway during oncogenesis. Thus, an ongoing, large-scale effort is underway to develop clinically active drugs that target elements of the PI3K pathway. However, conflicting data suggest that gain-of-function PIK3CA mutations may be associated with either a favorable or a poor clinical outcome, compared with the wild-type PIK3CA gene. In the current study, we performed a systematic review of breast cancer clinical studies. Upon evaluation of 2587 breast cancer cases from 12 independent studies, we showed that patients with tumors harboring a PIK3CA mutation have a better clinical outcome than

或者 those with a wild-type PIK3CA gene. Importantly, this improved prognosis may pertain only to patients with mutations in the kinase domain of p110α and to postmenopausal women with estrogen receptor-positive breast cancer. We propose three potential explanations for this paradoxical observation. First, PIK3CA mutations may interfere with the metastasis process or may induce senescence, which results in a better outcome for patients with mutated tumors. Secondly, we speculate

that PIK3CA mutations may increase early tumor diagnosis by modification of the actin cytoskeleton in tumor cells. Lastly, we propose that PIK3CA mutations may be a favorable predictive factor for response to hormonal therapy, giving a therapeutic advantage to these patients. Ultimately, an improved understanding of the clinical impact of PIK3CA mutations is critical for the development of optimally personalized therapeutics against breast cancer and other solid tumors. This 或者 effort will be important to prevent or explain therapeutic failures and select patients who are most likely to respond to new therapies that inhibit the PI3K pathway.
目的研究吲哚-3-甲醇(I3C)的重要衍生物3,3’-二吲哚甲烷(DIM)对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度DIM对SiHa细胞体外生长的抑制作用,流式细胞术检测DIM对SiHa细胞凋亡的影响,荧光显微镜观察细胞形态的变化;Western blotting检测不同浓度DIM对SiHa细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果 DIM对SiHa细胞的抑制作用呈时间-剂量依赖性,DIM对SiHa细胞干预48h的半数抑制浓度(IC50)为44.44μmol/L。分别以25、50、100μmol/L的DIM处理48h后,SiHa细胞的凋亡率分别为(10.09±1.32)%、(21.11±3.36)%和(55.46±6.33)%,阴性对照组为(4.56±0.

NOX3、NOX4、NOX5、 Duox1(Dual oxidase1)和Duox2等成员,在血管内皮细胞主要表达NOX2和NOX4,且NOX4表达水平比NOX2高20倍。进一步的研究显示,血管内皮细胞产生的ROS主要来源于NOX4。NOX活性受其亚组分p47PHOX和Rac-1的调节。p47PHOX磷酸化之后,从胞浆转到胞膜上与细胞色素b558结合,在Rac-1的参与下激活NOX。 为了探讨高糖引起血管内皮细胞氧化应激的作用机制,我们用高浓度(20mmol/L)葡萄糖处理人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),通过流式细胞术检测ROS水平的改变。结果显示,与正常培养条件相比,20mmol/L葡萄糖处理的HUVECs中ROS水平显著升高。分别用几个产生ROS途径的抑制剂DPI、Rotenone、Oxypurinol和L-NAME预处理后,NOX抑制剂DPI组ROS水平显著降低,而其他抑制剂组的ROS水平无明显变化。提示NOX是高葡萄糖诱导HUVECs产生ROS的主要来源。进一步应用RT-PCR、

此网站 Real-time PCR和Western blot分析NOX亚组分表达的变化。结果表明,]HUVECs表达NOX4及其亚组分p22PHOX、p47PHOX、p67PHOX和Rac-1。NOX4的表达在20mmol/L葡萄糖处理后显著升高,其它亚组分则无显著性改变。同时,我们应用SuperArray公司的第二代功能分类基因芯片技术对葡萄糖处理后HUVECs氧化应激与抗氧化相关基因的表达进行了检测。结果显示,20mmol/L葡萄糖引起氧化应激与抗氧化相关部分基因的表达升高或者降低,其中值得注意的是,与对照组相比,Dual oxidase2基因表达升高近13倍,而Superoxide dismutase3基因表达水平明显降低。观察葡萄糖对NOX4活性的调节机理的结果表明,在高浓度葡萄糖条件下,HUVECs的NOX4活性调节主要发生在两个水平上,一是通过PKC激活NOX4,二是通过p47PHOX和Rac-1的膜移位来调节NOX4的活性。为了研究NOX4表达水平的改变对ROS产生的影响及其对HUVECs损伤的作用,我们采取“失去功能”和“获得功能”两种策略,分别将NOX4-siRNA或NOX4基因转染入HUVECs,获得极低表达甚至无表达或高表达NOX4水平的HUVECs。分析比较这些内皮细胞和对照内皮细胞(未转入NOX4-siRNA和NOX4)中ROS水平与细胞凋亡。我们的实验结果表明,与未转染质粒的对照组和转染GFP质粒表达质粒组相比,转染NOX4质粒组的HUVECs中ROS明显升高(p<0.05)；流式细胞术、Hoechst染色和TUNEL染色结果均显示,转染NOX4质粒组的HUVECs发生明显凋亡(p<0.05)；与葡萄糖处理组相比,SB203580能明显抑制高糖所致P-p38MAPK的升高(p
镉(cadmium,

寻找更多 Pazopanib制造商 Cd)是一种有毒的重金属元素,易在体内蓄积,镉能够诱导多种器官或组织损伤并导致相关功能丧失,包括肾脏、肝脏、肺脏、骨骼、心血管系统和免疫系统。体内外研究均证明,镉可引起细胞凋亡、氧化损伤及DNA损伤,且凋亡与氧化应激、线粒体损伤、促分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、死亡受体、Caspase及非Caspase依赖性通路的激活密切相关。肝脏是镉损伤的主要靶器官之一,目前对镉致肝细胞损伤研究较多,但其作用机制还不完全清楚。本研究以大鼠肝细胞系BRL3A细胞为模型,采用细胞生物学和分子生物学方法研究镉对BRL3A细胞的毒性作用机制及NAC的保护作用。研究内容如下：

1.镉致BRL3A细胞毒性损伤及NAC的保护作用 为研究镉致BRL3A细胞的毒性损伤及NAC的保护作用,以0、10、20、40μmol/L醋酸镉分别作用BRL3A细胞12h(分别为a-d组),同时以2mmol/LNAC、2mmol/L NAC(预孵育30min)+20μmol/L醋酸镉分别作用BRL3A细胞12h(为e-f组)。倒置显微镜观察细胞形态的变化,采用MTT法测定细胞存活率,比色法测定培养上清中LDH活性。结果表明,随着镉浓度的增加,细胞皱缩、变圆、结构不完整,细胞存活率逐渐降低(p<0.01),LDH释放量显著增加(p0.05); NAC与镉联合处理组细胞形态皱缩,细胞存活率极显著升高(p<0.01),上清中LDH活性极显著降低(p<0.01或p0.05),NAC与镉联合处理组细胞凋亡形态有所减少,凋亡率极显著降低(p<0.01或p<0.01或p<0.05),SOD、GSH-Px活性显著或极显著降低(p<0.01或p0.05)；NAC与镉联合处理组细胞ROS含量显著降低(p<0.01或p<0.01),Caspase3、Caspase9活性显著或极显著升高(p<0.

检测弥慢性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)户Y_盒结合蛋白1(YB-1)的表达情况,探讨其与肿瘤细胞耐药、化疗疗效及预后的关系。2.体外诱导Daudi细胞多药耐药的形成,检测YB-1基因沉默前后Daudi细胞中mdr1基因诱导性表达和细胞耐药特征形成的差异,探讨YB-1蛋白在诱导性多药耐药形成中的作用。3.探讨阿霉素诱导Daudi细胞耐药过程中,YB-1核易位与核蛋白同mdr1启动子Y-box序列结合活力、mdr1基因启动子转录活性以及MAPK/ERK信号通路活化的关系。

方法：1.采用Envision两步法检测DLBCL和反应性淋巴结增生(RLH)石蜡标本中YB-1、磷酸化ERK(pERK)和P-gp的表达,分析YB-1的核定位与细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)、pERK的相关性,并探讨其与临床参数的关系。2.构建针对人YB-1的特异性shRNA真核表达载体：把被9 bp序列间隔的针对YB-1不同靶序列的三个19 bp的反向重复序列及随机片段,插入携带人U6SnRNA启动子的pGensil-1质粒载体中,分别用PstⅠ和SalI酶切鉴定,并将酶切鉴定正确的重组质粒作测序分析。3.采用脂质体介导的方法将三种人YB-1基因特异性shRNA及随机片段的真核表达载体(YBX1、YBX2、YBX3、pGenesil-1/con)转染进Daudi细胞中,G418抗性筛选两周后获得阳性克隆。取YB-1基因干扰效果最好的细胞株进行后续实验,以转染随机片段的细胞株(Daudi/c)为对照组。4.阿霉素间歇性长期作用于Daudi细胞,诱导细胞耐药,RT-PCR方法检测YB-1、mdr1基因表达情况,FCM检测各组细胞mdr1基因编码的P-gp的表达水平,Western blotting法检测诱导过程中YB-1蛋白表达及其核易位的变化情况,四唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞的生长抑制率(IR)与IC50值,细胞内罗丹明123(Rho123)潴留实验检测P-gp的功能状态。5.采用凝胶迁移滞后实验(EMSA)方法检测各实验组核蛋白与mdr1启动子Y-box序列的结合活性。6.采用染色质免疫沉淀(chromatin

或者 immunoprecipitation, ChIP)实验来进一‘步证实YB-1与mdrl启动子Y-box序列在细胞内特异性结合。7.合成mdrl基因启动子片段以及YB-1结合位点突变序列,克降到荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中,构建pMDR-luc和突变pMDR-Ym-luc重组载体；川脂质体将重组的报告基因载体与内参质粒p-半乳糖苷酶(β-gal)瞬时共同转染Daudi细胞,荧光素酶活性分析mdr1基因启动子活性的改变。8.运用MAPK抑制剂PD98059预处理Daudi细胞1小时后,再加入阿霉素诱导耐药(诱导方法同上),Western 寻找更多 blotting法检测ERK蛋白及其磷酸化情况、YB-1蛋白表达及其核易位的变化。RT-PCR检测mdr-1, YB-1基因表达,FCM检测P-gp的表达情况。 结果：1.DLBCL组与RLH组的YB-1胞浆阳性表达率差异无显著性(P=0.763),而DLBCL组的YB-1胞核阳性表达率明显高于RLH组(P＜0.05); DLBCL临床Ⅲ-Ⅳ期、结外淋巴组织侵犯及骨髓浸润患者的YB-1胞核阻性表达率和pERK表达强度明显高于Ⅰ～Ⅱ期、结内病变及无骨髓浸润患者,差异有显著性(P<0.005)均呈正相关；化疗有效组的YB-1核阳性和pERK表达强度表达率明显低于化疗无效组(P<0.038)；化疗有效组的P-gp表达强度显著低于化疗无效组(P
血管生成在胚胎发育、机体稳态的维持、创伤修复、以及女性生理周期等生理过程中发挥着重要的作用。而且血管生成异常与多种疾病相关,包括缺血性疾病、慢性炎症以及恶性肿瘤等。促血管生成能力是非肿瘤组织细胞发生恶性转化所必须的,是重要的肿瘤恶性标志之一。对肿瘤血管生成的不断深入研究,为临床肿瘤治疗带来了许多新途径。肿瘤血管生成机制复杂多样,是目前肿瘤研究的热点问题之

Gadd45a是一种DNA损伤诱导基因,可被多种应激损伤诱导表达,包括紫外线照射、电离辐射、血清饥饿、化疗药物作用等。Gadd45a可诱导细胞周期阻滞、细胞凋亡、DNA损伤修复等。此外研究发现,Gadd45a具有多种抑瘤活性,参与维持基因组稳定性,降低MMPs转录表达,维持细胞接触性抑制和同型细胞间粘附,从而抑制细胞侵袭转移。 本研究通过体内体外实验证实Gadd45a可抑制肿瘤血管生成。Gadd45a失活可促进移植瘤内血管密度升高,增强鸡胚尿囊膜血管生成反应,以及在体外可显著增强内皮细胞迁移和成管能力。为了进一步研究Gadd45a调控血管生成的机制,我们对Gadd45a敲除和野生型的MEFs细胞进行了表达谱芯片分析,发现有五种促血管生成因子在Gadd45a敲除的MEF细胞中表达升高。其中VEGF-A是最重要的促血管生成因子,MMP3属基质金属蛋白酶,参与细胞外基质重塑。RealTime 还有 PCR和western blot证实VEGF-A和MMP3的变化与芯片结果相符。同时,我们发现在HeLa细胞中,敲降Gadd45a也可诱导VEGF-A和MMP3表达升高。进一步的研究发现,Gadd45a调控肿瘤血管生成与STAT3(?)目关。Gadd45a可抑制STAT3 Ser727的磷酸化。STAT3是一种重要的转录因子,其活性受到两个磷酸化位点的调节,包括Tyr705和Ser727位点。同时,VEGF-A和MMP3是STAT3调控的下游蛋白。上述结果提不,Gadd45a可通过抑制STAT3 Ser727的磷酸化,下调VEGF-A和MMP3表达。STAT3 Ser727的磷酸化可受到多种激酶调控,其中包括p38和mTOR。本研究发现mTOR特异性抑制剂Rapamycin可显著抑制这两株MEFs细胞STAT3 Ser727位点磷酸化。Pulldown实验证实GST-Gadd45a可结合mTOR,而不结合STAT3.

0、25.1、46.7μg/mL,而pH值为10时,反应产物不存在CD值。色氨酸与香兰素的反应产物也有较好的QR诱导活性(CD值为11.8μg/mL)。此外,基于Pictet-Spengler原理对perlolyin进行有机合成,所得的合成化合物与天然分离化合物的QR诱导活性一致。 以Hepa 1c1c7和Hep G2细胞模型,探讨了酱油癌症预防成分的分子作用机理。结果表明,儿茶酚的作用机制中包含非典型的氧化应激过程,而Flazin、perlolyrin和大豆苷元则产生氧化还原信号。Flazin和perlolyrin的活性发挥须经细胞色素P450的1A2亚族酶进行代谢激活。Perlolyrin的信号传导经由PI3K通路,但未影响转录因子Nrf2的核转录水平;儿茶酚的信号传导是通过抑制p38激酶信号通路,上调了Nrf2的核转移量从而增加了QR酶的表达;flazin则是激活了p38信号通路增强了QR酶的表达,且Nrf2也是其信号转递的一个重要环节。
研究背景 类风湿关节炎(Rheumatoid

Arthritis, RA)是一种以关节滑膜为主要靶组织的慢性高致残性自身免疫性疾病,以进展性、侵蚀性关节炎为主要表现。RA是造成我国人群丧失劳动力和致残的主要疾病之一。目前类风湿关节炎的治疗主要包括非甾体抗炎药(non-steroidal 此网站 antiinflammatory drugs, NSAIDs)、改善病情抗风湿药(disease

modifying antirheumatic drug, DMARDs)及生物制剂。虽经过正规早期联合多种DMARDs药物治疗,仍有部分RA患者疗效不佳；同时随着治疗的延长,药物疗效逐渐减弱,对治疗药物无反应或低反应,出现耐药现象,导致治疗失败。耐药尤其是多药耐药(Multiple Drug Resistance, MDR)的形成是影响RA治疗效果的重要因素。作为治疗失败的原因之一,MDR在肿瘤和感染性疾病的治疗中已得以足够重视,但在RA的治疗中的研究还较少。 跨膜转运蛋白介导的细胞内药物排出增加,导致细胞内药物降低,是MDR的重要机制。P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)是迄今为止研究的最多也是最重要的MDR相关的蛋白。它的作用底物广泛,在抗风湿药物中,目前已明确糖皮质激素、氯喹等是P-gp的底物。有研究报道难治性类风湿关节炎P-gp表达和活性增高,P-gp参与类风湿关节炎多药耐药的产生。TNF-α是RA发病机制中居中心地位的促炎症因子,参与RA复杂的细胞网络反应,其水平与疾病活动程度相关,并随疾病的缓解而降低。目前已证实TNF-α可影响多种细胞系P-gp的表达和活性,参与MDR的形成。但在RA中TNF-α是否影响P-gp的表达和活性,参与MDR的形成,国内外尚未见报道。本研究拟通过检测RA初治组、RA治疗有效组、RA难治组患者外周血单个核细胞P-gp表达和功能、TNF-αmRNA,血清TNF-α水平,对P-gp与类风湿关节炎多药耐药进行相关性研究,筛选RA耐药的分子标志,研究RA对DMARDs的耐药特征,分析P-gp与TNF-α及疾病活动的相关性。在此基础上,在体外实验中我们观察TNF-α对RA外周血单个核细胞P-gp的影响,探寻TNF-α对RA外周血单个核细胞P-gp的调控机制,从整体、细胞、胞内信号转导水平深入了解炎性因子TNF-α对RA selleck合成 P-gp的作用及RA多药耐药的影响。这一研究将为我们更深入了解RA多药耐药的特征及形成机制提供理论基础,并进一步探寻预防和逆转耐药的方法和途径,给类风湿关节炎的治疗带来新的突破。

第一部分P-糖蛋白与类风湿关节炎多药耐药及TNF-α水平的相关性研究 目的：检测正常对照组、RA初发未治组、RA治疗有效组、RA难治组患者外周血单个核细胞P-gp表达和功能、TNF-αmRNA,血清’TNF-α水平,分析P-gp与RA多药耐药及TNF-α相关性,探讨P-gp、TNF-α在RA多药耐药中的作用及其相关性。 方法：入选RA初治组、治疗有效组、难治组患者和正常对照组各20例为研究对象。RA初治组未经任何DMARDs及生物制剂治疗。RA治疗有效组和难治组以联合甲氨蝶呤、来氟米特为基础治疗药物,未经糖皮质激素和生物制剂治疗。入组RA患者进行疾病活动度评分(DAS28)。采集入组患者血标本进行血清和外周血单个核细胞的分离。以流式细胞仪检测外周血单个核细胞的P-gp的表达,罗丹明123蓄积试验检测外周血单个核细胞的P-gp的功能,RT-PCR检测外周血单个核细胞TNF-αmRNA水平,ELISA检测血清TNF-α浓度。 BYL719数据表 结果： 1.外周血单个核细胞P-gp的表达和功能：在正常对照组有P-gp表达,但表达量和功能低；RA初治组、RA治疗有效组及RA难治组P-gp表达和功能均高于正常对照；RA难治组P-gp的表达和功能较RA初治组、RA治疗有效组明显增高,差异有统计学意义(P<0.01)；RA初治组P-gp的表达和功能高于RA治疗有效组(P<0.01)。RA各组TNF-αmRNA表达水平两两比较,差异有统计学意义(P<0.01),其中RA难治组TNF-αmRNA表达水平最高,RA治疗有效组TNF-αmRNA表达水平最低。RA各组血清TNF-α含量较正常对照组高(P<0.01),其中RA难治组明显高于RA初治组和RA治疗有效组(P<0.01),RA初治组高于RA治疗有效组(P<0.01)；RA难治组DAS28评分为7.02±0.93,明显高于其它两组(P<0.