2、LASS2基因对HCCLM3细胞转移能力影响的体外实验: 通过构建真核表达载体pCMV-HA2-LASS2,并将其转染至高转移潜能肝癌细胞系HCCLM3,经G418筛选,我们建立了稳定过表达LASS2基因的HCCLM3细胞系。通过划痕实验及体外侵袭实验,证实了LASS2基因在HCCLM3细胞中过表达后,H不CCLM3细胞在迁移、侵袭等转移能力上受到了明显的抑制。 3、LASS2基因对HCCLM3细胞转移能力影响的裸鼠体内实验: 裸鼠体内实验结果证实,当LASS2基因稳定过表达时,HCCLM3细胞的转移能力受到抑制。同时,我们采用原位酶谱方法,对裸鼠的肝移植瘤组织进行MMP-2/MMP-无9的活性进行检测,发现LASS2基因抑制了HCCLM3细胞MMP-2/MMP-9的激活。 LASS2基因在高转移潜能肝癌中低表达,在低转移潜能肝癌中高表达;综合体外及体内肿瘤转移实验的结果,以及LASS2基因在HCCLM3细胞过表达后,HCCLM3细胞MMP-2/MMP-9在激活方面也许的变化,这些证实LASS2基因对肝癌细胞HCCLM3的转移具有显著地抑制作用;结合在前期研究中,我们发现LASS2与V-ATPase的ATP6L亚基相互结合,提示LASS2基因抑制肝癌细胞HCCLM3转移的机制可能与LASS2蛋白结合ATP6L亚基后抑制V-ATPase的活性相关。 在第二部分中,着重于LASS2对V-ATPase泌氢功能影响的研究,分三组实验进行。