该文介绍了依赖交联固定的常规免疫共沉淀(X-ChIP),以及适用于10~3细胞级别微量实验材料的基于微球菌核酸酶非交联免疫共沉淀(ULI-NChIP)具体操作过程和注意事项。
转录通过调控下游基因的时空特异性表达影响植物生长发育。在转录调控机制的解析过程中,转录因子与DNA的相互作用是关键的一环。近年来,研究者利用酵母单杂交(Y1H)和凝胶阻滞迁移率实验ABT-888化学结构(EMSA)检测转录因子能否直接结合DNA;而瞬时表达技术则是一种检测转录因子对下游基因调控作用的便捷方式。该文对Y1H、EMSA和瞬时表达技术的原理、实验方法和相关注意事项进行详细阐述,以期为转录因子与DNA的互作研究提供参考方法。
UV-B辐射对植物的影响体现在多个水平,其会引起植物DNA损伤,造成有丝分裂异常,最终影响植物Batimastat的生长发育及生理生化过程。RAD21.3是黏连蛋白复合物的一个亚基,参与有丝分裂中染色体的分离。该研究以哥伦比亚生态型拟南芥(Arabidopsis thaliana)和atrad21.3突变体为材料,设置对照(CK)及UV-B处理组,对野生型(WT)、atrad21.3及过表达株系的根长、株高、抽薹时间和生理生化指标进行统计分析。利用碱什么性品红染色观察拟南芥根尖的有丝分裂现象,并统计畸变率。SPSS分析结果表明, UV-B处理后, WT UV-B和atrad21.3 CK的抽薹时间、株高及各项生理生化指标与WT CK相比无显著差异,但atrad21.3UV-B与之相比差异显著。通过烟草(Nicotianabenthamiana)的瞬时表达和亚细胞定位观察,发现RAD21.3集中在细胞核;进一步观察分裂期细胞发现落后染色体、染色体桥和游离染色体等异常现象。