本文总结了Hfq在DNA代谢调控中的近几年最新研究进展,并展望了其前景。
本研究运用反转录PCR与5′-及3′-末端快速扩增技术, 从缺刻缘绿藻(Myrmecia incisa Reisigl) H4301中克隆到胞苷二磷酸(CDP)-乙醇胺 二酰基甘油乙醇胺磷酸转移酶(EPT)的基因MiEPT。其cDNA序列全长1914 bp, 其中, 5′-非翻译区(UTRPexidartinib分子量)长217 bp, 3′-UTR长533 bp, 开放阅读框(ORF)长1164 bp, 编码由387个氨基酸组成的蛋白。以缺刻缘绿藻基因组DNA为模板扩增到该基因的DNA序列, 长为2853 bp。这两条序列的比对结果显示, MiEPT含有6个内含子, 它们将其ORF分隔成7个外显子。经预测, MiEPT系含有8个跨膜区的膜整合蛋白。多序列比结果Selleckchem 3-deazaneplanocin A显示, MiEPT具有CDP-醇磷脂酰转移酶基序。基于不同物种EPT的氨基酸序列所构建的邻接聚类结果表明, MiEPT与已知功能的莱茵衣藻EPT聚类在一起, 由此推测, MiEPT可以催化磷脂酰乙醇胺(PE)的生物合成。为鉴定MiEPT的基因功能, 利用表达载体pET-23a实现了在大肠杆菌中重组表达MiEPT的目的。使用超离心技术, 获得部分纯化可能含重组MiEPT的组分。体外酶促反应的产物经薄层层析分析显示, 重组表达的MiEPT具有EPT和胆碱磷酸转移酶(CPT)的活性。经棒状薄层色谱的定量分析, 可知MiEPT的EPT酶活性是CPT的10.3倍, 从而表明, MiEPT在缺刻缘绿藻中能同时参与PE和磷脂酰胆碱的生物合成, 但更倾向地利用CDP-乙醇胺以生产PE。
构建副溶血性弧菌转录调节因子VtrB敲除菌株和回补菌株,探讨VtrB在副溶血性弧菌抵抗胆汁中的作用。