成功建立稳定DJ-1核内高表达的HL-60细胞系。 测序结果证实，DJ-1基因的细胞核定位表达质粒pCMV/myc/nuc-EGFP-DJ-1的插入序列与DJ-1全长cDNA的GenBank序列完全一致。荧光显微镜观察高表达组细胞中可见绿色荧光信号。Western blot检测高表达组细胞核内DJ-1蛋白的表达量明显增高，提示成功稳定的DJ-1核内高表达HL-60细胞株。2.DADS对DJ-1细胞核内高表达的HL-60生物学行为的影响。 MTT法显示：DADS作用前，高表达组细胞生长能力明显高于对照组和空载体组细胞（P<0.05）。DADS作用后，三组细胞的增殖能力明显减弱，且高表达组细胞增值抑制率明显低于对照组和空载体组（P<0.05），DADS作用后，三组细胞相对集落形成率均减低（P<0.05），高表达组细胞G1期细胞百分率明显低于对照组和空载体组（P<0.05），提示DJ-1核内高表达可促进HL-60细胞增殖作用。DADS作用后，三组细胞G1期百分率均明显提高（P<0.05），S期均明显降低（P<0.05）；DADS作用后，三组细胞的还原率均明显升高（P<0.05）；DADS作用后，三组细胞迁移能力均明显减弱（P<0.05）；DADS作用后，三组细胞穿膜数明显减少，侵袭能力均明显减弱（P
目的：糖原合成酶激酶3（Glycogen

Sorafenib体内 synthase kinase-3，GSK-3）是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，参与了细胞增殖、生长及凋亡，调节神经极性和神经稳态，并在神经炎症过程中起重要作用。其亚型GSK-3β已被证实与成瘾药物的行为学效应存在一定的关联，应用GSK-3β抑制剂能够降低氯胺酮的神经毒性及类精神失常作用。但GSK-3β是否参与氯胺酮奖赏和成瘾及其具体作用机制目前仍不明确。本研究通过使用特异性及非特异性的GSK-3β抑制剂对氯胺酮的自身给药及复吸行为进行干预，从而明确GSK-3β在氯胺酮奖赏、奖赏动机以及复吸行为中所起的作用。 实验一：氯胺酮自身给药对脑区GSK-3β表达的影响 方法：成年雄性SD大鼠（n=16）进行颈静脉插管手术，恢复后随机平均分为两组：自身给药组和对照组。自身给药组大鼠用FR1程序进行氯胺酮自身给药的训练及维持，对照组大鼠每天置于自身给药装置中相同的时间但不获得氯胺酮。维持期的最后一天给药结束后两小时对大鼠进行断头取脑，Western Blot检测尾壳核（CPu）、海马（Hip）、伏隔核（NAc）、前额皮层（PFC）及腹侧被盖区（VTA）中磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）及总GSK-3β（t-GSK-3β）的表达。另选两组成年SD大鼠作为氯胺酮急性处理的对照，腹腔注射生理盐水（n=3）或40mg/kg的氯胺酮（n=3）后两小时进行断头取脑，用Western

Blot的方法检测CPu、Hip、NAc、PFC及VTA中p-GSK-3β及t-GSK-3β的表达。 结果：实验结果显示动物在氯胺酮0.5mg/kg/针的剂量下能够维持稳定的自身给药行为。Western B-Raf 抑制剂 drug Blot结果显示大鼠氯胺酮自身给药后，

GSK2656157 花费 CPu (F(2,5)=15.804, p<0.05)中磷酸化GSK-3β占总GSK-3β的比例与对照组和急性处理组相比明显降低（p0.05），但同样降低了累进频率中氯胺酮的给药次数（p<0.05）。氯胺酮引燃的氯胺酮觅药行为测试结果显示使用LiCl后可以显著降低氯胺酮引燃的觅药行为（p<0.05），但其无效鼻触反应也显著减少（p
目的：研究盐霉素对前列腺癌细胞系PC-3在体外的克隆形成能力的影响及其与β-catenin和mTOR信号通路的关系,探讨盐霉素抗前列腺癌干细胞的作用机制。 方法：盐霉素处理呈对数生长的前列腺癌细胞系PC-3,观察其克隆形成变化；采用流式分析仪检测盐霉素处理PC-3后肿瘤干细胞比例的变化；用WesternBlot法检测盐霉素处理后前列腺癌细胞中的β-catenin和mTOR信号通路的蛋白表达变化；实时定量PCR法检测盐霉素处理后前列腺癌细胞中β-catenin信号通路的靶基因表达水平变化；比较ALDHhigh亚群和ALDHlow亚群克隆形成变化；GSK3抑制剂和雷帕霉素分别处理PC-3,观察其对克隆形成能力的影响并检测其肿瘤干细胞比例的变化。 结果：①盐霉素对前列腺癌细胞克隆形成能力的影响：浓度分别为0、0.25uM、0.5uM、luM、2uM和4uM的各处理组的克隆形成数分别为41、39、36、30、18和9。②盐霉素对PC-3中肿瘤干细胞比例的影响：流式细胞仪分析结果显示荧光阴性对照组肿瘤干细胞比例均值为0.05%,空白对照组肿瘤干细胞比例均值为7.40%,盐霉素4uM处理12h组肿瘤干细胞比例均值为1.86%,通过两样本均数t检验,空白对照组与实验组之间差异具有统计学意义(p<0.05)。③盐霉素对不同干细胞亚群细胞增殖能力的影响：ALDHhigh亚群的细胞较ALDHlow亚群具有更强的增殖能力,且盐霉素对前列腺癌干细胞具有选择性杀伤作用,ALDHhigh亚群和ALDHlow亚群的空白组与盐霉素处理组的克隆数分别为20、4、9和5。④盐霉素对PC-3干细胞的β-catenin和mTOR信号通路的影响：克隆形成实验中,空白对照组、盐霉素组、雷帕霉素组和GSK3抑制剂组的克隆数分别为80、51、70和124,流式细胞分析仪检测干细胞比例变化,GSK3抑制剂组高表达ALDH细胞达9.35%,雷帕霉素组中高表达ALDH的比例为1.62%,雷帕霉素+盐霉素组中肿瘤ALDH高表达比例为0.94%,而GSK3抑制剂+盐霉素组的比例为2.95%,差异具有统计学意义(P<0.