之后通过尿素洗涤包涵体的方式分别纯化三个重组蛋白，将纯化后的蛋白分别免疫BALB/c小鼠，四次免疫后成功制备出针对于UL11、U16和UL21的多克隆抗体。蛋白免疫印迹和间接免疫荧光结果表明，本研究制备的三个多克隆抗体均具有良好的免疫原性，能够与伪狂犬病病毒变异株JS-2012的UL11、UL26、UL21蛋白发selleck HPLC控制生特异性反应。这三种抗体为伪狂犬病病毒被膜蛋白的功能和相互作用研究提供了重要的工具。
本研究首先利用同源重组一步克隆法将鸡传染性贫血病病毒(CIAV)的VP3基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体上,经IPTG诱导及SDS-PAGE分析成功获得了重组蛋白rGST-VP3的https://www.selleck.cn/products/AZD1152-HQPA.html表达。随即以纯化的重组蛋白rGST-VP3免疫Balb/c小鼠,通过脾细胞与SP2/0细胞融合以及间接免疫荧光(IFA)筛选,获得2株稳定分泌CIAV-VP3抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8;亚型鉴定表明,CIAV-VP3-4D7和CIAVFHPI分子量-VP3-4G8均为IgG1;效价测定发现,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8的腹水间接免疫荧光效价分别为1 102 400与1 12 800;Western blot进一步证实,CIAV-VP3-4D7和CIAV-VP3-4G8均能识别重组蛋白rGST-VP3。本研究结果为后期研究VP3蛋白在CIAV致病中作用及其诱导凋亡分子机制奠定了坚实的物质基础。